基于BDNF-AKT-mTOR通路探讨百合抗抑郁作用的有效成分及其机制的研究

作     者：韦莹莹 

作者单位：宜春学院 

学位级别：硕士

导师姓名：陈春林;张蔓

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：抑郁 百合水提物 百合多糖 百合皂苷 mTOR BDNF 

摘      要：目的:观察百合水提物对于急性抑郁小鼠模型的作用,并研究百合皂苷和多糖的体内外抗抑郁作用及其机制。为百合治疗抑郁类疾病提供实验依据。方法:1.将40只小鼠随机分组,给予百合水提物1周后,通过体重和旷场实验,研究百合水提物对小鼠体重和自主活动的影响。通过悬尾实验和强迫游泳实验,研究百合水提物对急性抑郁小鼠的改善作用。采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测每组小鼠血浆中皮质酮(Corticosterone,CORT)水平。免疫印迹法(Western Blot)检测百合水提物低、中、高剂量组对急性抑郁小鼠前额叶皮层中脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)等相关蛋白的表达水平。2.采用CORT诱导SH-SY5Y细胞损伤,建立细胞损伤模型。CCK-8法检测百合皂苷和多糖对损伤细胞的保护作用。将48只小鼠随机分组,预防给药1周后,通过体重和旷场实验,观察百合皂苷和百合多糖对小鼠体重和自主活动的影响;通过悬尾实验和强迫游泳实验,观察百合皂苷和百合多糖对急性抑郁小鼠的改善作用。采用ELISA检测每组小鼠血浆中皮质酮水平。免疫印迹法测百合多糖以及百合皂苷对急性抑郁小鼠前额叶皮层中BDNF等相关蛋白的表达水平。结果:1.百合水提实验结果:给药1周后,在旷场实验中,与对照组相比,氟西汀组和不同剂量百合水提物的爬格子数和站立次数无显著性,表明百合水提物并未对小鼠中枢神经系统产生兴奋作用。从体重变化的结果来看,给药1周未对小鼠的体重产生影响,无显著性差异。在悬尾实验中,低、中、高剂量的百合水提物能够显著改善抑郁小鼠的不动状态的持续时间;同样的在强迫游泳实验中,小鼠不动状态的持续时间也显著降低。ELISA检测结果显示,百合水提物降低了小鼠血浆中CORT水平。Western Blot检测结果显示给药1周后,抑郁小鼠前额叶皮层中BDNF、磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶(p-AKT/AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR/m TOR)、突触后致密物95(PSD95)和突触素(Synapsin,SYN)的相对表达较对照组蛋白水平有升高趋势。2.百合皂苷和多糖实验结果:体外结果显示,400μM的CORT浓度细胞存活率在50%左右,该浓度可用于后续实验造模。0.2 mg/L、0.6 mg/L的百合皂苷和多糖均能够显著提高细胞存活率。在动物实验中,给药1周后,在旷场实验中,与对照组相比,氟西汀组和不同剂量百合皂苷和多糖的爬格子数和站立次数无显著性,表明百合皂苷和多糖并未对小鼠中枢神经系统产生兴奋作用。从体重变化的结果来看,给药1周未对小鼠的体重产生影响,无显著性差异。在悬尾实验中,能够显著改善抑郁小鼠的不动状态的持续时间;同样的在强迫游泳实验中,小鼠不动状态的持续时间也显著降低。ELISA检测结果显示,百合皂苷和多糖降低了小鼠血浆中CORT水平。Western Blot检测结果显示给药1周后,抑郁小鼠前额叶皮层中BDNF、p-AKT/AKT、p-m TOR/m TOR、PSD95和SYN的相对表达较对照组蛋白水平有升高趋势。结论:百合水提物以及百合多糖和皂苷可以通过降低血浆中CORT水平,调控BDNF/AKT/m TOR信号通路改善前额叶皮层的突触可塑性,从而改善行为绝望小鼠的抑郁样行为。