水鬼蕉鳞茎中生物碱类细胞毒活性成分研究

作     者：马文静 

作者单位：广东药科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：何祥久

授予年度：2022年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：石蒜科 水鬼蕉 生物碱 结构鉴定 抗增殖活性 

摘      要：水鬼蕉[Hymenocallis littoralis(Jacq.)Salisb.],别称蜘蛛兰、蜘蛛百合,为石蒜科(Amaryllidaceae)水鬼蕉属(Hymenocallis Salisb.)的一种多年生鳞茎草本植物。水鬼蕉原产于美洲热带地区及西印度群岛,后由福建、广东等地作为观赏植物引种栽培。作为一种石蒜科植物,水鬼蕉鳞茎中含有大量的生物碱类成分,这些石蒜科生物碱已经被证实具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗寄生虫等活性。本论文对水鬼蕉鳞茎中的生物碱类成分进行了研究,水鬼蕉干燥鳞茎用75%乙醇提取后浓缩得到水混悬液,经环己烷除脂,混悬液用10%盐酸调节至p H 2后,用乙酸乙酯萃取得到非生物碱成分,乙酸乙酯萃取后的水层再用25%氨水调节至p H 10,最后用乙酸乙酯萃取得到总生物碱部分。总生物碱部分利用硅胶色谱柱、ODS反相色谱柱、Sephadex LH-20柱色谱以及半制备型HPLC等色谱方法对总生物碱进行分离纯化,得到36个生物碱单体化合物,并利用各种波谱学方法(UV、IR、MS、NMR、ECD)对其结构进行了鉴定,分别鉴定为:6-oxo-12β-hydroxy-5,6-dihydroplicane(1*),6-oxo-12β-methoxy-5,6-dihydroplicane(2*),6-oxo-5,6-dihydroplicane(3),5,6-dihydroplicane(4),12β-hydroxyplicane(5*),(+)-plicane(6),N-hydroxyethyl-11,12-seco-5,6-dihydroplicane(7*),(-)-secoplicamine(8),5,12-dehydro-11,12-seco-5,6-dihydroplicane(9*),(3S,4a S,6a S,12b S)-3,11-dimethoxy-5-methyl-4,4a,5,6-tetrahydro-8H-isochromeno[3,4-c]indole-6a,10(3H)-diol(10*),6-(2-methylaminophenyl)-N-methyl-N-[2-(4-hydroxyphenyl)-ethyl]-piperonylamine(11*),tazettine(12),jonquailine(13),6-Omethylpretazettine(14),3-epimacronine(15),egonine(16),tazettamide(17),N-methyl-5,6-dihydroplicane(18),obliquine(19),haemanthamine(20),haemanthidine epimer B(21),haemanthidine epimer A(22),lycorine(23),dihydrolycorine(24),5,6-dihydrobicolorine(25),N-methylcrinasiadine(26),trispheridine(27),zephycandidine A(28),lycoranine D(29),hymenolitatine A(30),5-Methyl-5H-[1,3]dioxolo[4,5-b]carbazole(31),narciclasine-4-O-β-Dglucopyranoside(32),4-O-β-D-glucopyranosyl-trans-dihydronarciclasine(33),β-adenosine(34),N-[2-(4-hydroxyphenyl)]ethylacetamide(35),nicotinamide(36)。化合物1-33为石蒜科生物碱,34-36为简单生物碱,其中化合物1,2,5,7,9-11为7个未见报道的新化合物,化合物3,4,17和31为新的天然产物。对16个具有10b螺碳原子的石蒜科生物碱以及一个belladine型生物碱进行了体外细胞毒活性的评价,发现化合物11、13和14对四种人肿瘤细胞(Hep G2,He La,SPC-A-1,Fa Du)表现出一定的抗增殖作用。化合物11对Hep G2细胞的增值抑制作用明显,IC50值为22.97±3.99μM。生物碱13和14是一对差向异构体,但是它们的抗增殖活性差异显著,尤其是对He La细胞表现出了不同的细胞毒性。利用细胞形态学评估、流式细胞术分析、Western blot分析、克隆形成和划痕试验,对化合物11、13和14的作用机制进行了深入研究。发现生物碱11、13和14可剂量依赖性诱导Hep G2细胞和He La细胞发生凋亡,从而具有抗肿瘤细胞增殖作用。此外,它们还具有抑制肿瘤细胞迁移的作用。