小檗碱治疗多囊卵巢综合征慢性炎症作用机制的研究

作     者：刘学思 

作者单位：济宁医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：乔岩岩

授予年度：2023年

学科分类：1005[医学-中医学] 100509[医学-中医妇科学] 10[医学] 

主      题：多囊卵巢综合征 小檗碱 治疗 慢性炎症 多囊卵巢综合征 小檗碱 慢性炎症 AMPK p-AMPK SirT1 NF-κB 

摘      要：第一章 小檗碱对多囊卵巢综合征治疗作用的研究目的:通过对应用小檗碱的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者的临床资料进行统计学分析,探讨小檗碱治疗PCOS的作用机制。方法:选取2021年7月至2023年1月就诊于济宁市第一人民医院生殖医学科的61例PCOS患者,给予盐酸小檗碱片口服治疗,观察小檗碱治疗前后的性激素水平、糖脂代谢指标、体质量指数(body mass index,BMI)和体脂百分数(body fat percentage,BFP)以及外周血炎症因子水平的变化。结果:应用小檗碱治疗后PCOS患者的卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)较治疗前均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。应用小檗碱治疗后PCOS患者的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IR)均较治疗前降低,差异有统计学意义(P0.05)。应用小檗碱治疗后PCOS患者的总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)均较治疗前降低,差异有统计学意义(P0.05)。应用小檗碱治疗后PCOS患者的BMI和BFP均较治疗前降低,差异有统计学意义(P0.05)。应用小檗碱治疗后PCOS患者的C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)均较治疗前降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:小檗碱在改善PCOS患者的性激素与代谢紊乱方面具有十分显著的作用且小檗碱能够改善PCOS患者的慢性炎症状态。第二章 小檗碱治疗多囊卵巢综合征慢性炎症作用机制的研究目的:通过丙酸睾酮诱导建立PCOS小鼠模型,并给予PCOS模型小鼠小檗碱灌胃治疗。对小鼠动情周期、子宫和卵巢形态学变化、卵泡和黄体的数量及形态变化进行观察分析,同时对小鼠卵巢组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,pAMPK)、沉默信息调节因子1(silent information regulator of transcription 1,SirT1)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)进行检测分析,探究小檗碱的抗炎作用机制。方法:购买昆明种系雌性小鼠40只,随机分为5组,每组8只;分别为空白对照组、PCOS模型组、100mg小檗碱组、200mg小檗碱组以及400mg小檗碱组。丙酸睾酮用玉米油稀释后,给予PCOS模型组、100mg小檗碱组、200mg小檗碱组以及400mg小檗碱组小鼠以10mg/kg体重每日腹部皮下注射,空白对照组每天给予腹部皮下注射同等剂量玉米油,持续6周;于建模第6周采用阴道脱落细胞检查法检测动情周期。将盐酸小檗碱片配制成小檗碱生理盐水悬混液,在建模成功后,100mg小檗碱组、200mg小檗碱组以及400mg小檗碱组小鼠按照100mg/kg体重、200mg/kg体重、400mg/kg体重分别给予小檗碱每日灌胃,空白对照组给予灌胃同等剂量生理盐水,持续6周;于小檗碱干预第6周采用阴道脱落细胞检查法检测动情周期。小檗碱干预完成后,颈椎脱臼法处死小鼠,获取小鼠卵巢组织,将一侧卵巢置于-80℃冰箱保存,另一侧卵巢置于10%中性缓冲福尔马林固定液中固定。将卵巢组织石蜡包埋切片后进行HE染色观察小鼠卵巢卵泡和黄体数量和形态变化;免疫组织化学染色观察分析小鼠卵巢组织中AMPK、SirT1以及NF-κB的表达及分布变化。提取卵巢组织蛋白,蛋白免疫印迹法分析小鼠卵巢中AMPK、p-AMPK以及NF-κB的表达变化。结果:PCOS模型诱导完毕时,空白对照组的平均动情天数明显低于PCOS模型小鼠,差异具有统计学意义(P0.05),PCOS模型诱导成功;小檗碱干预完毕时,PCOS模型组的平均动情天数明显高于其余四组,差异具有统计学意义(P0.05);经过两两比较,发现空白对照组、100mg小檗碱组、200mg小檗碱组、400mg