Disulfiram和Venetoclax联合对急性髓系白血病的杀伤作用及机制研究

作     者：常林林 

作者单位：三峡大学 

学位级别：硕士

导师姓名：主鸿鹄;张世忠

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：Disulfiram Venetoclax 急性髓系白血病(AML) 药物协同 

摘      要：研究背景:急性髓系白血病(AML)是一种侵袭性血液系统恶性肿瘤,该病在老年人群中的发病率高达19.4/10万,随着我国人口老龄化的加剧,AML发病率会进一步提高。传统AML治疗以化疗方案为主,靶向药物的开发使AML走向靶向治疗新时代。Bcl-2抑制剂Venetoclax,因其不局限于特定突变,靶向线粒体凋亡途径,受到极大关注。但是Venetoclax单药疗效有限,在与其他化疗药物联合时效果显著,因此一般建议联合用药使得患者实现更深度的缓解。Disulfira应用于临床已有70年,近年来多项研究表明该药包括白血病等多种癌症中具有抗肿瘤活性。鉴于Disulfiram和Venetoclax都具有诱导白血病细胞凋亡作用,有必要明确这两种药物是否具有协同抗AML作用,为AML靶向治疗提供新的治疗方案。目的:本研究以AML细胞系及原代细胞为研究对象,旨在探讨Disulfiram及Venetoclax单药及联合应用对AML细胞活力及凋亡水平的影响,明确两药联合是否具有协同作用,进一步探讨两药协同作用机制,为AML治疗提供新治疗策略。方法:Disulfiram和Venetoclax单药或联合作用于AML细胞原代细胞,Cell Titerlumi检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,线粒体膜电位,细胞内活性氧生成,WB检测凋亡蛋白以及抗凋亡蛋蛋白表达水平;用MOLM-13-luci细胞构建CDX动物模型,验证Disulfiram和Venetoclax两药联合在体内疗效。结果(1)Disulfiram及Venetoclax两药对五种AML细胞系均有细胞毒性,且呈剂量依赖;(2)Disulfiram和Venetoclax联合可以抑制细胞增殖,使用Compu Syn软件计算两药联合指数(CI),结果显示两药联合CI1,提示两药具有协同作用;(3)选取适宜浓度,单药及联合作用48 h后,流式细胞术检测单药及联合后细胞凋亡率,实验结果显示,单药均可导致细胞凋亡,联合后细胞凋亡率进一步增强;(4)收集已确诊AML患者原代细胞,选取适宜浓度单药及联合作用于原代细胞,结果显示在Venetoclax敏感及耐药原代细胞中,联合Disulfiram后细胞增殖进一步受到抑制;(5)Disulfiram和Venetoclax联合会导致细胞内ROS生成增加,细胞线粒体膜电位降低,导致细胞凋亡;(6)Western blot检测表明Disulfiram联合Venetoclax会使凋亡蛋白表达增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1、Bcl-x L表达降低。结论:Disulfiram和Venetoclax单药对AML细胞系具有剂量依赖毒性,且Disulfiram联合Venetoclax在AML细胞系及原代细胞具有协同作用,两药联合较单药细胞凋亡率进一步增强,且两药联合诱导ROS生成、降低线粒体膜电位,凋亡蛋白表达升高、抗凋亡蛋白表达降低。