“大黄-桃仁”药对调控子宫腺肌病Rho GTPase的作用研究

作     者：雷娅 

作者单位：三峡大学 

学位级别：硕士

导师姓名：付先芸

授予年度：2023年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：大黄-桃仁药对 子宫腺肌病 Rho GTPases 分子对接 

摘      要：研究背景:大黄桃仁药对(Dahuang-Taoren,DT)来源于中医经典方,作为活血化瘀类的经典植物药物组合,DT常用于缓解子宫腺肌症(adenomyosis,AM)的痛经症状。越来越多的证据表明Rho GTPases可能在AM进展中发挥重要作用,然而,DT对AM中Rho GTPases的潜在调控作用尚不清楚。为此,我们对DT对AM Rho GTPases的干预作用进行了评估。目的:探讨DT对AM Rho GTPase的调控作用。方法:(1)收集临床标本,对比AM患者及对照组子宫内膜组织中的RAS同源基因家族成员A(Ras homolog gene family,Rho A)、Rho效应激酶(Rho kinase 1,Rock1)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)以及细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)蛋白水平。提取分离培养原代子宫内膜间质细胞(adenomyosis endometrial stromal cells,AMESCs),通过MTT增殖实验和划痕试验观察细胞的生存活力和迁移能力,Western blot实验检测Rho A、Rock1、Rac1和Cdc42蛋白表达情况。(2)将30只ICR雌性小鼠随机分成对照组(n=10)、模型组(n=10)和DT组(n=10),AM小鼠模型采用同种异体垂体移植法建立。热板痛和机械痛实验检测小鼠痛觉敏感性,HE染色法检测子宫组织病理浸润程度,透射电镜观察细胞动力学特征变化,免疫荧光染色法检测蛋白Rho A、Rock1、Rac1和Cdc42的表达水平和定位情况。(3)采用分子对接技术验证Rho GTPase蛋白靶点与药物核心活性成分的结合能力。结果:(1)临床组织Western Blot实验结果显示,与对照组比较,AM患者Rho A、Rac1、Cdc42、Rock1蛋白水平均明显上调。体外成功提取分离出原代AMESCs。MTT实验和划痕实验结果显示,DT剂量依赖性抑制AMESCs增殖和迁移。Western Blot实验结果显示,0.25 mg/ml DT和0.5 mg/ml DT显著抑制了AMESCs的Rho A、Rock1、Cdc42和Rac1的蛋白水平。(2)动物实验结果显示,与模型组比较,经DT治疗后小鼠热板痛及机械痛的痛阈增高,病理浸润程度减轻。电镜结果表明,与对照组比较,模型组小鼠子宫内膜上皮细胞排列紊乱、体积缩小,细胞形态由柱状变为梭形或不规则形;细胞间紧密连接、桥粒连接及细胞周边指状突起减少,细胞膜局部形成皱褶。经DT治疗后上述动力学特征变化改善。免疫荧光染色结果显示,Rho A、Rock1、Rac1、Cdc42可定位表达于子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞及平滑肌细胞。与对照组比较,模型组小鼠Rho A、Rock1和Rac1的表达显著上调,经DT治疗后回调。(3)分子对接结果显示,DT中的药物的活性成分与Rho A、Rock1、Rac1和Cdc42均具有良好或者较强的结合能力。结论:本研究表明AM中存在Rho GTPases的过度激活。DT可有效缓解AM痛觉过敏反应、改善病理浸润程度,其作用可能与抑制Rho GTPases调控细胞动力学特征有关。