肺形草化学成分研究
作者单位：江西中医药大学
学位级别：硕士
导师姓名：张忠立;左月明
授予年度：2023年
学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床]
主 题：肺形草 慢性阻塞性肺疾病 UPLC-Q-TOF-MS 化学成分
摘 要：目的:本课题组前期依据“肺脾两虚,痰瘀内阻的中医病机,建立肺脾两虚型慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）病理模型,研究发现肺形草提取物具有治疗COPD的药理疗效,以该药理活性为导向对肺形草化学成分进行初步研究的基础上,本课题采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间-串联质谱（UPLC-Q-TOF-MS）和现代色谱分析分离纯化等技术与方法对肺形草化学成分进行系统研究,为深入探讨肺形草治疗C OPD的药效物质基础和完善肺形草的用药标准提供理论依据。方法:1.采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间-串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）技术对八个产地肺形草样本（江西省九江市修水县、四川省甘孜州泸定县、湖北省十堰市房县、福建省三明市建宁县、江西省九江市德安县花桥镇、云南省安宁市、江西省宜春市靖安县中源乡、浙江省温州市永丰地区）开展成分分析,在负离子模式下,通过Peakview软件中的XIC Manager功能,建立了肺形草已知化学成分的数据库,结合相关化合物的质谱数据、裂解规律、有关文献和标准品进行对照鉴定,并对所鉴别的成分采用主成分分析（PCA）、聚类分析（CA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）的方法综合分析八个产地肺形草化学成分的差异性,为肺形草治疗COPD的药效物质基础提供依据。2.通过采用现代分析分离纯化技术与方法,如大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、ODS-C柱色谱、聚酰胺柱色谱、重结晶、制备高效液相色谱法,对肺形草的70%乙醇总提物经大孔吸附树脂30%乙醇洗脱部位和60%乙醇洗脱部位进行分离纯化得到单体化合物,并应用UV、IR、NMR、MS等现代技术和方法对分离出的单体化合物进行结构解析鉴定。结果:1.利用UPLC-Q-TOF-MS技术对八个产地肺形草成分进行分析,使用负离子模式扫描,结合自建数据库文献报道和标准品化合物,根据质荷比和裂解规律共鉴别出51个化合物,其中黄酮8个、呫吨酮10个、环烯醚萜6个、生物碱3个、醌类4个、三萜3个、苯丙素2个、酚酸7个、酯类3个、脂肪酸2个、其他类3个。PCA及OPLS-DA分析显示,不同产地肺形草清晰的分成3类,t检验P1的差异性指标成分有11个。2.肺形草以70%乙醇回流提取两次,每次提取1.5小时,合并两次提取物蒸干溶剂,取2.80 kg水混悬后上AB-8大孔吸附树脂,依次以水、30%乙醇、60%乙醇和95%乙醇洗脱,得各洗脱部位干膏依次为700 g、520 g、650 g、210 g。利用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ODS-C柱色谱、高效液相制备色谱等多种现代分析分离技术以治疗COPD的药理活性为指导,对肺形草的30%乙醇部位和60%乙醇部位的化学成分进行分离纯化制备单体化合物。通过理化常数测定和波谱数据分析鉴定出26个单体化合物的结构,其中黄酮类化合物5个:槲皮素（1）、4′,5-二羟基-7-甲氧基-6-C-β-D-葡萄糖苷（2）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（3）、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷（4）、芒果苷（5）;环烯醚萜类化合物5个:莫诺苷（6）、落干酸（7）、龙胆苦苷（8）、獐芽菜苷（9）、Manuleosides H（10）;酯类化合物3个:岩白菜素（11）、香草酸甲酯（12）、邻苯二甲酸二丁酯（13）;苯丙素类化合物2个:咖啡酸（14）、阿魏酸（15）;酚酸类化合物8个:4-甲基邻苯二酚（16）、没食子酸（17）、苯甲酸（18）、对苯二酚（19）、2,6-二甲氧基苯酚（20）、水杨酸（21）、香草酸（22）、3,5,6-trihydroxy-7-megastigmen-9-one（23）;其他类化合物3个:尿嘧啶（24）、5-羟甲基糠醛（25）、苦杏仁苷（26）,其中化合物2,3,10,12,15-17,19,20,23为首次从该属植物中分离得到。结论:本论文采用UPLC-Q-TOF-MS技术与方法能快速准确分析与鉴定出肺形草中非挥发性成分,为系统分离与鉴定肺形草中化合物奠定基础,分析技术与方法结合能够更真实、有效地评价肺形草中所含的化学成分,为全面阐明肺形草所含化学成分类型和治疗COPD药效物质基础研究提供理论依据。以药理活性为指导,应用现代色谱分析分离纯化技术与方法对肺形草的化学成分进行系统研究,特别是指标性成分和特征性成分的分离纯化与鉴定,为后期肺形草质量控制研究提供标准品和检测依据,为肺形草的资源利用及治疗COPD新药开发奠定基础和提供理论基础。
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