SLERT对子宫内膜癌转移和侵袭的影响及机制研究

作     者：王晨辉 

作者单位：河南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：田君

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：SLERT BDNF TrkB EMT 子宫内膜癌 

摘      要：背景子宫内膜癌(endometrial cancer EC)是女性生殖系统恶性肿瘤的主要类型之一。目前EC的发病率逐年上升,且呈现出年轻化的趋势。在某些西方国家及我国某些经济发达地区,EC的发病率甚至超过了宫颈癌,成为影响女性最常见的生殖系统恶性肿瘤。虽然大多数EC患者预后良好,然而晚期EC死亡率高,尤其发生转移时,情况更加不容乐观。激活BDNF/Trk B信号通路可以促进EMT,增加EC的侵袭和转移。最近的研究表明,一种名为SLERT的新型Lnc RNA在基因调控中起着关键作用,可能与肿瘤的发生发展有关。前期实验研究证实SLERT在EC肿瘤组织及EC患者血浆中高表达,且与EC的FIGO分期、浸润深度、淋巴血管浸润和淋巴转移等显著相关,由此猜想SLERT可能与EC的发生、发展有关。在此,我们探讨了SLERT对EC转移和侵袭的影响。目的本实验通过研究SLERT在EC中的作用,有望从新的角度揭示EC转移及侵袭的分子机制,从而为EC临床诊断、治疗、预测预后提供理论依据。方法1.统计92位患者的生存信息,利用SPSS.22.0分析SLERT表达情况和生存期的关系,同时分析SLERT的表达水平和患者肿瘤分期、分级、淋巴结转移等临床特征的相关性。2.使用Trizol试剂从EC细胞中提取总RNA,反转录得到c DNA后,使用q RT-PCR进行基因扩增和定量检测。将SLERT sh RNA感染的KLE和AN3CA细胞与对照组分别放在含有2μg/ml嘌呤霉素的培养基中培养,筛选得到表达稳定的SLERT sh RNA细胞株用于后续实验。为探究SLERT对EC细胞生物学功能的影响,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,评估SLERT对EC细胞体外增殖的影响;利用细胞划痕实验探究SLERT对EC细胞体外迁移能力的影响;进一步通过Transwell细胞侵袭实验研究SLERT对EC细胞体外侵袭的影响。3.利用Western-Blot技术分别检测SLERT缺失及SLERT高表达的EC细胞中BDNF、Trk B及EMT相关蛋白表达情况。利用TCGA数据库分析SLERT与E-Cadherin、NCadherin、Vimentin和BDNF的相关性,验证实验猜想。4.合成BDNF启动子并插入PGL3-basic载体中,使用Lipofectamine3000转染293T细胞、KLE和AN3CA细胞,通过双荧光素酶报告实验检测启动子活性,进一步探究SLERT和BDNF m RNA间的相互作用。结果1.统计分析后发现SLERT与FIGO分期、浸润深度、淋巴血管浸润、淋巴结转移呈正相关,提示高SLERT表达与EC患者预后不良相关。***-8实验提示SLERT下调后不影响细胞活力,细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验提示SLERT下调减弱EC细胞的迁移和侵袭。3.检测SLERT敲减后的KLE细胞和AN3CA细胞中EMT相关蛋白水平,发现SLERT与E-Cadherin呈负相关,N-Cadherin和Vimentin呈正相关,提示SLERT敲减后可能抑制EC细胞的EMT过程。4.分析TCGA-EC数据库,发现SLERT与E-Cadherin呈显著负相关,而与Vimentin、N-Cadherin、BDNF呈显著正相关,提示SLERT可能通过BDNF控制EMT,从而促进EC细胞迁移和侵袭。5.双荧光素酶报告实验显示SLERT的敲低对BDNF启动子活性没有影响,但是使用放线菌素D处理后,SLERT敲低的KLE和AN3CA细胞中BDNF m RNA水平显著降低,提示SLERT可能抑制BDNF m RNA的降解;而过表达SLERT后,BDNF m RNA的表达水平升高,提示SLERT可能影响BDNF m RNA的转录过程。6.过表达SLERT后,E-Cadherin水平降低,BDNF及其下游的Trk B蛋白水平升高,KLE和AN3CA细胞侵袭能力增强,BDNF敲除后侵袭能力下降,提示SLERT通过调控BDNF/Trk B信号通路诱导EMT,从而增加EC细胞侵袭能力。结论SLERT作为促转移的lnc RNA,可能通过增加BDNF m RNA,激活BDNF/Trk B信号转导通路促进EMT过程,从而增强EC细胞的侵袭和转移能力。这些结果为深入探究SLERT在EC发生发展中的作用提供重要线索,为寻找新的治疗靶点和临床干预提供了实验参考依据。