血浆外泌体miR-105-5p、miR-221-3p与帕金森病的关系研究

作     者：叶珊珊 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：马爱军

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：帕金森病 外泌体 miRNAs 生物标志物 血浆 

摘      要：背景与目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的神经系统退行性病变,其诊断主要依据临床表现及影像学检查,这两种检查标准都是主观的,缺乏敏感性。脑组织中路易小体的形成有助于PD的诊断,但脑组织获取困难,在临床中无法实施。因此人们需要寻找新的生物标志物。目前已经有多种研究证实微小RNA(Micro RNAs,miRNAs)在神经退行性疾病的发展中起着非常关键的作用,而外泌体包含多种蛋白质和遗传物质(miRNAs、lnc RNAs、circ RNAs),并且广泛存在于各种体液中,如血清、尿液、唾液等,获取方便。由于外泌体具有低免疫原性,不易被机体自身清除;直径小,并且是双层脂质囊泡结构,可以保证携带的miRNAs通过血脑屏障穿越到脑脊液发挥作用,因此外泌体作为一种优秀的媒介,在神经系统疾病中得到广泛研究。最近研究发现miR-105-5p和miR-221-3p在PD的发病机制中起着重要的作用,为了进一步进行实验验证,本研究通过检测PD患者血浆外泌体中miR-105-5p和miR-221-3p的表达水平,探讨了miR-105-5p和miR-221-3p作为生物标志物在PD诊断中的潜在作用,分析miR-105-5p与PD及运动症状、PD合并快速眼动睡眠行为障碍(Rapid-eye-movement sleep behavior disorder,RBD)、PD合并痴呆的关系。方法:收集2018年9月-2019年7月青大附院就诊的121例PD病人和同期的92例健康查体者的血浆。首先将静脉采集的全血标本进行分离,并且提取血浆外泌体,利用透射电镜对外泌体的生理形态进行拍照,用免疫印迹法(Westernblot,WB)测定外泌体特异标记蛋白CD63和CD9,利用新型外泌体粒径分析仪(q Nano)并对粒子的直径范围进行记录,证实为外泌体后,对其miRNAs进行逆转录、实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)。所有PD患者依据帕金森病统一评分量表(Unified Parkinson’s disease rating scale,UPDRS)、Hoehn-Yahr(The modified Hoehn-Yehr,H&Y)分级量表、简易精神状态检查表(Mini-mental State Examination,MMSE)、快速眼动睡眠期行为紊乱筛查量表(RBD Screening Questionnaire,RBDSQ)进行评分。根据运动症状分为:震颤型(tremor-dominant,TD)、运动迟缓-肌强直型(bradykinesia with slowness and impaired dexterity,BSID)、姿势不稳-步态困难型(postural instability and gait difficulty,PIGD);根据非运动症状分为:PD-痴呆亚组与PD-非痴呆亚组,PD-RBD组与PD-非RBD组。通过分析血浆外泌体中miR-105-5p、miR-221-3p的相对表达水平,绘制受试者工作曲线(Receiver operating curve,ROC)曲线,判断是否与PD运动症状、PD合并痴呆或RBD存在相关性。结果:(1)PD组和健康对照组相比,观察到PD组血浆外泌体miR-105-5p相对表达水平(1.81±1.80)较对照组(1.25±1.01)显著上调,差异有统计学意义(t=2.16,P0.05)。(2)血浆外泌体miR-105-5p的ROC曲线下面积(AUC=0.655,95%CI=0.618-0.633,P0.05)。(4)PD-痴呆组(2.362±2.228)血浆外泌体miR-105-5p相对表达水平高于PD-非痴呆亚组(2.070±2.097),差异无统计学意义(P0.05)。(5)PD-RBD组(1.751±1.780)血浆外泌体miR-105-5p在相对表达水平低于PD-非RBD组(1.881±1.805),差异无统计学意义(P0.05)。结论:1、血浆外泌体的miR-105-5p的表达水平与PD有相关性,表达较健康人群显著上调,可能是诊断PD的生物标志物。血浆外泌体的miR-221-3p的表达水平在PD中表达上调,差异无明显相关性。2、血浆外泌体的miR-105-5p的表达水平与PD运动症状、PD合并痴呆或者RBD等非运动症状没有明显相关性。