ADSCs促进糖尿病溃疡合并神经病变小鼠溃疡愈合的实验研究
作者单位：中南大学
学位级别：硕士
导师姓名：王先成
授予年度：2023年
摘 要：研究背景糖尿病是一种发病率高、并发症多、危害大的全身代谢疾病,不仅大大消耗了全球医疗卫生资源,而且严重降低了患者的生活质量。糖尿病足在糖尿病患者中发病率高达25%,由于其临床治疗效果有限,导致患者不仅饱受疼痛的折磨,而且截肢率很高。研究表明:糖尿病发病引起的皮肤感觉异常、疼痛、麻木等不适感的早期神经组织损害是可以逆转的。作为目前皮肤与组织工程领域研究热点之一,由于分离与培养技术已相对成熟,脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)不断从再生医学向临床医学转化。然而脂肪干细胞修复糖尿病患者的作用及其机制仍不十分明确。为此,本研究构建了一种糖尿病溃疡合并神经病变的小鼠模型,采用ADSCs创周皮下注射的方式观察与分析其治疗效果与修复机制。研究目的本研究通过建立一种稳定的、可靠的糖尿病溃疡合并神经病变的小鼠模型,通过模拟糖尿病的病理生理,进而研究ADSCs对糖尿病溃疡及神经病变的治疗效果与修复机制,为进一步开展糖尿病的临床治疗提供实验基础。研究方法1.首先通过高脂饮食喂养联合不同剂量的链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)腹腔注射诱导糖尿病小鼠模型,建立一个全层皮肤缺损创面。观察小鼠体重、行为、血糖情况;组织切片观察创面及神经病理学改变;免疫组织化学技术观察表皮内神经纤维密度。2.造模成功后,将糖尿病溃疡合并神经病变小鼠随机分为ADSCs组与PBS组。分别采用大量培养与传代后的ADSCs及PBS创周皮下注射给药;以普通溃疡小鼠模型Normal组,采用同等剂量PBS创周皮下注射给药。3.对小鼠创面拍照,计算各组创面愈合率;创面组织HE及Masson染色观察皮肤愈合情况;坐骨神经甲苯胺蓝染色观察神经组织形态变化情况;创面皮肤免疫组织化学染色检测皮下神经纤维密度;ELISA检测NGF因子的表达水平;Western bolt检测c-jun、JNK表达情况。研究结果1.低剂量STZ多次注射后小鼠体重逐渐下降,血糖浓度持续上升,小鼠行动力减缓,毛发粗糙,坐骨神经出现脱髓鞘变化,创面皮肤表皮内神经纤维密度降低,表明本研究成功建立了一个稳定、可靠的糖尿病溃疡合并神经病变的小鼠模型。2.不同组小鼠给药后发现,ADSCs组糖尿病小鼠创面愈合率明显高于PBS组,差异具有统计学意义;无糖尿病的普通组小鼠创面愈合情况最好,与ADSCs组差异无统计学意义。3.一系列体内实验结果表明,糖尿病溃疡合并神经病变小鼠出现了神经组织脱髓鞘及神经纤维密度降低等情况,ADSCs注射治疗能有效恢复神经组织的结构,增加神经纤维数量。其发生的机制可能与c-jun/JNK通路被抑制,NGF表达增加有关,但具体机制仍有待深入的研究。研究结论1.本研究成功建立了一种稳定的、可靠的糖尿病溃疡合并神经病变的小鼠模型,该模型成模率高,为糖尿病的临床治疗提供了实验基础。2.通过ADSCs治疗糖尿病溃疡合并神经病变的小鼠的实验,证实了其在促进创面愈合、促进神经组织修复方面具有积极的作用,为临床治疗研究奠定了基础。3.ADSCs治疗糖尿病溃疡合并神经病变的小鼠的实验研究还发现,ADSCs治疗糖尿病溃疡合并神经病变与上调NGF表达和抑制c-jun/JNK通路有关,为深入研究其具体治疗机制奠定了一定基础。图21幅,表格4个,参考文献74篇
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