夏枯草-半枝莲对自身免疫性甲状腺炎大鼠的疗效及机制研究

作     者：钟丰鹰 

作者单位：北京中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘铜华

授予年度：2023年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：夏枯草 半枝莲 自身免疫性甲状腺炎 大鼠 Th1/Th2细胞平衡 Th17/Treg细胞平衡 

摘      要：目的:基于CD4+T淋巴细胞亚群平衡,探讨夏枯草-半枝莲治疗自身免疫性甲状腺炎(Autoimmune Thyroiditis,AIT)大鼠的药效及其可能的作用机制,为临床治疗AIT提供实验依据。方法:40只Lewis雌性大鼠按体重随机分为正常组和造模组,造模组大鼠经皮下多点注射异种甲状腺球蛋白和弗化剂,联合高碘饮水构建AIT模型。6周后将造模成功的大鼠随机分为模型组、夏枯草-半枝莲低剂量组(0.78 g·kh-1·d-1)、中剂量组(1.56g·kg-1·d-1)、高剂量组(3.12 g·kg-1·d-1),各组7只大鼠。对夏枯草-半枝莲三个剂量组的大鼠以0.01 mL·g-1·d-1为标准予以相应体积的水提物混悬液灌胃,正常组和模型组则按同标准予纯水干预。药物干预8周后,大鼠麻醉后眶静脉取血,流式细胞术检测血浆中辅助性T淋巴细胞(helper T lymphocytes,Th)亚群Th1、Th2、Th17和调节性T淋巴细胞(regulatoryTlymphocytes,Treg)的分布比例,并计算Th1/Th2、Th17/Treg比率变化;腹主动脉取血后,酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测血清中三碘甲腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)、游离T3(Free triiodothyronine,FT3)、甲状腺素(Thyroxine,T4)、游离T4(Freethyroxine,FT4)、促甲状腺激素(Thyroidstimulating hormone,TSH),以及甲状腺球蛋白抗体(Thyroglobulinantibody,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(Thyroid peroxidase antibody,TPOAb)和促甲状腺激素受体抗体(TSH receptor antibody,TRAb)的浓度;取大鼠甲状腺组织放入4%多聚甲醛中固定,行HE染色后光镜下观察甲状腺组织的病理变化,并用免疫组化法检测各组大鼠甲状腺组织内干扰素γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素 4(Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素 17(Interleukin-17,IL-17)、转化生长因子β(Transforming growth factor beta,TGF-β)的蛋白表达。结果:1.甲状腺抗体检测:与正常组相比,模型组的TPOAb、TGAb、TRAb浓度均显著升高(P0.01);经夏枯草-半枝莲水提物干预后,低、中、高剂量组的TPOAb、TGAb浓度与模型组比较均下降(P0.05),高剂量组的TRAb浓度降低(P0.05)。2.甲状腺功能检测:与正常组相比,AIT模型组大鼠的T3、T4、FT3、FT4浓度均升高,TSH浓度降低(P0.01);夏枯草-半枝莲低、中剂量组的T3、T4、FT3、FT4浓度与模型组比较均下降,TSH浓度升高(P0.05),高剂量组的T3(P0.01)、T4(P0.05)、FT3(P0.01)、FT4(P0.05)含量均明显降低,且TSH升高(P0.05),均具有统计学差异。3.形态学检测:正常组大鼠的甲状腺组织内可见结构完整、紧密排列的滤泡,上皮细胞完整,其腔内充满质地均匀的胶质。模型组的甲状腺滤泡结构可见明显被破坏或萎缩,上皮细胞变薄,腔内胶质减少或缺失,且组织间隙内有淋巴细胞浸润。夏枯草-半枝莲低剂量组的甲状腺滤泡被破坏情况相比模型组减少;与模型组和低剂量组相比,中、高剂量组的甲状腺滤泡和上皮细胞的结构更为完整,腔内胶质含量几乎无减少,组织间的淋巴细胞浸润程度明显减轻。4.流氏细胞术检测:与正常组比较,AIT模型组大鼠的Th1(P0.01)、Th2(P0.05)占CD4细胞的比例上升,Th1/Th2细胞比率无显著性上升;模型组的Th17细胞比例升高(P0.05),Treg细胞下降但无统计学差异,Th17/Treg比率上升(P0.01)。与模型组比较,夏枯草-半枝莲高剂量组的Th1、Th2细胞比例均下降(P0.01),Th1/Th2比率上升但无统计学意义;Th17细胞降低(P0.05),Treg细胞升高,Th17/Treg比率降低,均具有显著差异(P0.01)。5.免疫组化检测:与正常组对比,模型组甲状腺组织中IFN-γ、IL-4、IL-17的IOD/area值均上调,TGF-β的IOD/area值降低(P0.01)。与模型组相比,夏枯草-半枝莲低剂量组的IL-17的IOD/area值下降(P0.05);中剂量组IL-4、IL-17的IOD/area值减少,TGF-β的IOD/area值上升(P0.01);高剂量组中IFN-γ(P0.05)、IL-4(P0.01)、IL-17(P0.01)的IOD/area值减少,TGF-β(P0.01)的IOD/area值增加。结论:1.夏枯草-半枝莲能降低AIT大鼠血清中甲状腺自身抗体TPOAb、TGAb、TRAb浓度,纠正甲状腺功能,一定程度上改善甲状腺滤泡结构受损、淋巴细胞浸润的病理变化。2.夏枯草-半枝莲对纠正Th1/Th2偏移效果不显著,可能是通过降低外周血中Th1、Th2免疫细胞比例,及其细胞因子IFN-γ、IL-4在甲状腺组织的表达,以抑制免疫应答和炎症损伤而缓解AIT病情。3.夏枯草-半枝莲能够降低Th17细胞、升高Treg细胞的比例,并下调甲状腺组织中IL-17蛋白表达,上调TGF-β的表达水平,以纠正Th17/Treg失衡,从而抑制炎症和自身免疫攻击对组织的损伤,起到治疗AIT的作用。