Sec14L6在脂滴生物发生中的作用及机制研究

作     者：周田田 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：季维克

授予年度：2023年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071009[理学-细胞生物学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：脂滴 内质网 脂滴生物发生 Sec14L6 

摘      要：研究背景:转脂蛋白可能通过为脂滴(Lipid droplets,LDs)合成提供膜脂的方式,参与脂滴生物发生。但是,目前为止关于转脂蛋白在脂滴发生中的研究尚未系统开展,机制有待阐明。Sec14L6是哺乳动物中近年来新鉴定出的Sec14L-PITP家族的成员,目前并没有文章对Sec14L6进行深入研究,其如何在体内发挥作用,目前并不清楚。研究目的:探索Sec14L6在脂滴发生中的亚细胞定位、功能及相应的分子机制和生理意义。研究内容:siRNA文库筛选鉴定脂滴发生的关键新因子Sec14L6。首先通过对油酸(oleic acid,OA)孵育、EBSS处理后OA孵育及未经处理的细胞敲降Sec14L6,检测脂滴的数量,大小的变化,探索Sec14L6在脂滴生物发生中的作用。观察Sec14L6的亚细胞定位。筛选Sec14L6的互作蛋白。明确Sec14L6的招募因子。解析Sec14L6与其招募因子互作的分子机制。回补实验,检测Sec14L6与其招募因子的相互作用对脂滴生物发生的影响。明确Sec14L6在脂滴发生中的作用阶段。研究结果:Sec14L6敲降显著抑制OA诱导的脂滴发生。Sec14L6是可溶性蛋白。鉴定脂滴相关蛋白ACSL3是Sec14L6的招募因子。鉴定内质网蛋白PGRMC1是Sec14L6的另一招募因子。解析Sec14L6与ACSL3和PGRMC1的互作机制:ACSL3对Sec14L6的招募依赖 Sec14L6 的 Sec14domain。PGRMC1 通过结合 Sec14L6 的 GOLD domain招募Sec14L6。Sec14L6缺失ACSL3结合能力突变体无法挽救Sec14L6敲降表型。延时成像表明Sec14L6被特异性招募到内质网上的新生脂滴。研究结论:Sec14L6被招募因子ACSL3和PGRMC1招募到内质网上脂滴的合成/生长区域,促进脂滴的生物发生。