SGLT2抑制剂通过线粒体途径减轻脂肪肝冷缺血损伤的研究

作     者：杨汉文 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：赵于军

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：脂肪肝 冷缺血 线粒体 细胞凋亡 SGLT2 STAT3 ALDH2 

摘      要：目的:随着肝移植技术的发展,肝移植已成为公认的治疗终末期肝病患者的最有效的治疗手段。目前,等候肝移植的患者数量的稳步增加,与之相应的供体数量却相对不足。饮食结构发生变化,脂肪肝供体在供体池中的比例逐渐增加。因此脂肪肝在内的边缘供肝的维护显得至关重要。如何减轻脂肪肝冷缺血损伤成为移植界的难题。钠-葡萄糖协同转运蛋白2(sodium-dependent glucose transporters 2,SGLT2)是一种钠葡萄糖转运体,主要功能是促进葡萄糖的重吸收。SGLT2抑制剂早已广泛用于治疗2型糖尿病。在此,我们探讨SGLT2抑制剂在减轻脂肪肝冷缺血损伤中的潜在作用,以期为临床扩大供体池提供理论依据。方法:选取12只Wistar大鼠,分为SGLT2抑制剂恩格列净(empagliflozin,EMPA)组(n=6)和NaCl组(n=6)。在1周的适应性喂养及2周的蛋氨酸和胆碱缺乏(methionine and choline deficient diet,MCD)饮食造模后分别用EMPA或NaCl(10mg/kg/d)灌胃1周,再取出肝脏,确认造模成功后,将肝脏体外保存24 h。苏木素伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色比较炎性细胞浸润和肝血窦扩张程度,ELISA法检测炎性指标:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白介素-6(interleukin-6,IL-6)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)。电镜比较两组线粒体损伤的程度。为了探究其机制,后饲养18只Wistar大鼠,增加了信号转导与转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)抑制剂AG490组,即EMPA组(n=6),NaCl组(n=6)和AG490组(n=6)。1周的适应性喂养,2周的MCD造模后分别EMPA(10mg/kg/d)灌胃1周、NaCl(10mg/kg/d)灌胃1周、AG490(10mg/kg/d)腹腔注射1周。确认造模成功后,将三组肝脏体外保存24 h。蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)检测三组的磷酸化的信号转导与转录激活因子3(phosphorylated signal transducers and activators of transcription3,P-STAT3),乙醇脱氢酶2(alcohol-dehydrogenase 2,ALDH2)的蛋白表达。TUNEL试剂盒检测细胞凋亡程度,定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,q PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病2(B cell leukemia lymphoma 2,BCL2)和BCL2相关X蛋白基因(Bcl-2 associated X protein gene,BAX)的m RNA相对表达量。结果:EMPA组的炎性细胞浸润,肝血窦的扩张程度均低于NaCl组。EMPA组线粒体的破坏程度低于NaCl组。EMPA组的IL-6低于NaCl组(P0.01)。EMPA组的MDA,TNF-α低于NaCl组(P0.001)。EMPA组的P-STAT3,ALDH2的蛋白表达高于NaCl组。NaCl组的P-STAT3,ALDH2的蛋白表达高于AG490组。TUNEL结果提示EMPA组的细胞凋亡程度低于NaCl组,NaCl组的细胞凋亡程度低于AG490组。EMPA组BAX表达低于NaCl和AG490组(P0.001)。NaCl组BAX表达低于AG490组(P0.01)。EMPA组BCL2表达明显高于NaCl和AG490组(P0.001)。NaCl组BCL2表达高于AG490组(P0.05)。结论:SGLT2抑制剂EMPA可减轻脂肪肝冷缺血损伤,其机制可能与激活STAT3和ALDH2,保护线粒体,抑制凋亡有关。SGLT2抑制剂EMPA可作为减轻脂肪肝冷缺血损伤的潜在药物。图7幅,表14个,参考文献59篇