基于STAT3信号探索大黄酸调节肠道Peyer结免疫对IgAN的防治作用及机制研究

作     者：陈杉杉 

作者单位：江西中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：彭胜男

授予年度：2023年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：大黄酸 IgAN 肠黏膜 Peyer结 细胞因子 信号转导与转录激活因子3信号通路 

摘      要：目的:本课题通过研究大黄酸对免疫球蛋白A肾病(IgAN)模型大鼠信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路及小肠黏膜派尔集合淋巴结(Peyer结)免疫功能的影响,探讨大黄酸防治IgAN的作用及机制,为临床上IgAN的防治提供新的思路和可行性依据。方法:将40只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、IgAN模型组、大黄酸治疗组和大黄酸预防组,每组10只。IgAN模型组和大黄酸治疗组前6周牛血清白蛋白(BSA)隔日灌胃(400 mg/kg),大黄酸预防组前6周大黄酸(100 mg/kg)+BSA(400mg/kg)混悬液隔日灌胃;第6周和第8周脂多糖(LPS)尾静脉注射各1次(0.05 mg/次),四氯化碳(CCl)蓖麻油溶液皮下注射每周1次(0.6 m L/次),连续9周;正常对照组用等量生理盐水代替药物。第7周开始大黄酸治疗组和大黄酸预防组每日灌胃大黄酸(100 mg/kg),连续4周;正常对照组和IgAN模型组灌胃等量生理盐水。末次灌胃后,检测大鼠尿沉渣红细胞数、24小时尿蛋白定量(24 h-UTP)、血清肌酐(SCr)和血清尿素氮(BUN);酶联免疫吸附测定法(ELISA)测血清免疫球蛋白A(IgA)和小肠黏液分泌型IgA(s IgA)的含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察肾脏和Peyer结病理形态变化,并进行Katafuchi评分和体视学测量;免疫荧光(IF)观察肾小球系膜区IgA沉积情况;免疫组化法(IHC)检测小肠黏膜Peyer结白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)和转化生长因子-β(TGF-β)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)测小肠黏膜Peyer结STAT3和下游转录因子维甲酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)信使核糖核苷酸(m RNA)表达水平;蛋白免疫印迹技术(WB)测小肠黏膜Peyer结中磷酸化STAT3(p-STAT3)和RORγt蛋白表达情况。结果:1.大黄酸对IgAN模型大鼠尿沉渣红细胞数和24 h-UTP的影响:与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠尿红细胞数和24 h-UTP均显著升高(P0.01);与IgAN模型组比较,大黄酸治疗组和大黄酸预防组大鼠尿红细胞数和24 h-UTP均显著降低(P0.01)。2.大黄酸对IgAN模型大鼠SCr和BUN的影响:与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠SCr和BUN均显著升高(P0.01);与IgAN模型组比较,大黄酸治疗组大鼠SCr和BUN均降低(P0.05),大黄酸预防组大鼠SCr和BUN均显著降低(P0.01);与大黄酸治疗组比较,大黄酸预防组大鼠BUN显著降低(P0.01)。3.大黄酸对IgAN模型大鼠血清IgA和小肠黏液s IgA的影响:与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠血清IgA和小肠黏液s IgA浓度均显著升高(P0.01);与IgAN模型组比较,大黄酸治疗组和大黄酸预防组大鼠血清IgA和小肠黏液s IgA浓度均显著降低(P0.01);与大黄酸治疗组比较,大黄酸预防组大鼠血清IgA浓度显著降低(P0.01)。4.大黄酸对IgAN模型大鼠肾脏组织病理学改变的影响:与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠肾小体增大,肾小囊扩张,球内系膜增生、纤维化明显,肾小管肿胀阻塞(P0.01);与IgAN模型组相比,大黄酸治疗组和大黄酸预防组大鼠肾小体肥大、系膜增生纤维化以及肾小管肿胀等情况均有不同程度的改善(P0.01);与大黄酸治疗组比较,大黄酸预防组大鼠肾小体肥大、系膜增生纤维化以及肾小管肿胀等情况有明显改善(P0.01)。5.大黄酸对IgAN模型大鼠肾脏组织IgA沉积的影响:正常对照组大鼠肾脏组织IgA荧光不明显。与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠肾皮质显现亮绿色颗粒状IgA沉积(P0.01);与IgAN模型组比较,大黄酸治疗组和大黄酸预防组大鼠肾皮质荧光强度减弱(P0.01);与大黄酸治疗组比较,大黄酸预防组大鼠肾皮质荧光减弱更加鲜明(P0.01)。6.大黄酸对IgAN模型大鼠小肠黏膜Peyer结病理形态的影响:与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠Peyer结内生发中心增大,体密度明显增加(P0.01);与IgAN模型组比较,大黄酸治疗组和大黄酸预防组大鼠Peyer结内生发中心均减小,体密度均明显降低(P0.01)。7.大黄酸对IgAN模型大鼠小肠黏膜Peyer结中IL-17、IL-6、TGF-β表达的影响:与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠小肠黏膜Peyer结中IL-17、IL-6、TGF-β的表达均显著升高(P0.01);与IgAN模型组比较,大黄酸治疗组和大黄酸预防组大鼠IL-17、IL-6、TGF-β的表达显著降低(P0.01)。8.大黄酸对IgAN模型大鼠小肠黏膜Peyer结中STAT3 m RNA和RORγt m RNA表达的影响:与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠小肠黏膜Peyer结中STAT3m RNA、RORγt m RNA表达均显著升高(P0.01);与IgAN模型组比较,大黄酸治疗组和大黄酸预防组大鼠STAT3 m RNA、RORγt m RNA表达显著降低(P0.01)。9.大黄酸对IgAN模型大鼠小肠黏膜Peyer结中p-STAT3和RORγt蛋白表达的影响:与正常对照组相比,IgAN模型组大鼠小肠黏膜Peyer结中p-STAT3和RORγt蛋白表达均显著升高(P0.01);与IgAN模型组比较,大黄酸治疗组和大黄酸预防组大鼠p-STAT3和RORγt蛋白表达显著降低(P0.01);与大黄酸治疗组比较,大黄酸预防组大鼠p-STAT3和RORγt蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:大黄酸可以改善IgAN模型大鼠的小肠黏膜免疫功能,对IgAN模型大鼠具有一定的防治作用,且预防作用优于治疗作用。其作用机制或与大黄酸抑制IgAN模型大鼠Peyer结内STAT3信号通路上的相关因子表达,改善小肠黏膜Peyer结内免疫细胞因子之间的平衡有关。