KLF4通过负调控apelin基因表达抑制食管癌发展机制研究

作     者：何震宇 

作者单位：河南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张双林;张国瑜

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：食管癌 Krüppel样因子4 apelin基因 

摘      要：目的:临床食管癌患者的五年生存率维持在17%～20%,且食管癌具有高度侵袭性,复发率极高,约75%的患者多在确诊后一年内死亡。尽管近年来食管癌的多学科治疗和早期诊断技术有了较大进展,但其死亡率仍无明显下降。新的研究表明,在食管癌患者血清样本中,apelin/APJ基因表达水平明显高于正常血清样本。Apelin/APJ在心脏、血管、脑、肺、胃肠道、肾脏和骨骼肌等多种组织中都有表达,在细胞增殖与分化、迁移与侵袭、炎症与凋亡等方面都发挥重要作用,可以参与多种细胞的信号转导过程,所以在调节人体生理和病理生理活动方面可发挥重要作用。Krüppel样因子4(KLF4)能够与其下游靶基因启动子区域内的GKLF结合原件相结合,直接调控其下游靶基因的转录水平,参与细胞周期调控和细胞增殖分化,促进胚胎发育,调节炎症反应等。但KLF4对食管癌的发生发展是否有着抑制作用,文献报道甚少。因此,早期诊断食管癌并及时有效防治,探寻KLF4在食管癌中与apelin基因的调控机制是本项目要解决的关键问题。方法:收集我院2021年08月～2022年08月经食管癌根治术切除的癌组织和癌旁组织标本50例,均经病理学诊断为鳞癌。患者肿瘤标准均取自原发灶,癌旁组织为距离肿瘤边缘高于5cm区域,标本取出后迅速放置在液氮内冷冻,-80℃冷冻待用。免疫组化、实时荧光定量PCR、Western blot检测癌组织和癌旁组织中KLF4、apelin表达情况。食管癌细胞系ECA109,购于中国上海科学院,快速复苏后重悬至含有10g/dl胎牛血清的细胞培养液中培养,放置在37℃,5%CO2的全湿度培养箱中。隔天更换新鲜培养液,细胞长至95%左右时,1:3进行细胞传代。分别进行细胞培养、细胞转染,Western Blot法检测KLF4转染效率、MTT检测细胞增殖、Transwell实验检测细胞迁移与侵袭变化、检测KLF4和apelin的靶向关系。结果:1.食管癌组织内KLF4 mRNA表达量(0.45±0.07)低于癌旁组织(1.00±0.12);食管癌组织内apelinmRNA表达量(1.67±0.25)高于癌旁组织(1.22±0.11)(P0.05)。apelin阳性表达在患者不同分化程度和淋巴结转移方面差异有统计学意义(P0.05)。***-KLF4 组 KLF4 mRNA 表达水平为(2.18±0.33),高于 LV-NC 组的(1.00±0.09),差异有统计学意义(P0.05)。***分析显示,与LV-NC组细胞相比,ECA109细胞系培养3d、4d、5d时LV-KLF4组细胞增殖活性显著降低(P0.05)。***109细胞系培养48h,LV-KLF4组细胞迁移率为(78.16±8.61)%,均低于LV-NC组的(99.86±10.25)%,差异有统计学意义(P0.05)。***109细胞系LV-KLF4组细胞侵袭数量分别为(218±27)个,低于LV-NC组的(483±25)个(P0.05)。***-KLF4组apelin蛋白表达水平低于LV-NC组(P0.05)。9.通过搜索数据库(TargetScan)显示,apelin 3’-UTR具有对应的配对和KLF4结合应用。萤光素酶报告基因测定来检测KLF4和apelin的关系,共转染的细胞的相对荧光素酶活性明显降低应用KLF4和apelin的3’-UTR(P0.05)。结论:***在食管癌组织中表达高于癌旁组织,apelin阳性表达和患者分化程度及淋巴结转移相关;***4在食管癌组织中表达低于癌旁组织,KLF4阳性表达和患者临床分期及淋巴结转移相关;3.食管癌组织中KLF4表达与apelin表达呈负相关;***4过表达可抑制食管癌细胞的增殖、迁移与侵袭,其作用机制可能和靶向抑制apelin基因表达相关。