肽类抗生素及中药单体联合其他抗菌药物对泛耐药鲍曼不动杆菌生物被膜的作用研究

作     者：孟千琳 

作者单位：成都医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：凌保东;袁明勇

授予年度：2022年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：泛耐药鲍曼不动杆菌 同源性分析 生物被膜 肽类抗生素 中药单体 协同效应 

摘      要：目的研究泛耐药鲍曼不动杆菌(XDRAB)的同源性及生物被膜的形成能力,进一步了解院内XDRAB分子流行病学现状;研究5种临床现有的肽类抗生素(多粘菌素B、多粘菌素E、万古霉素、杆菌肽、替考拉宁)对XDRAB生物被膜形成能力、黏附能力、生物被膜形成相关基因(aba I,omp A,bfm R,bfms,csu E,pga A)表达的影响;研究肽类抗生素分别与5种临床常用的抗菌药物(亚胺培南、美罗培南、阿奇霉素、利福平、替加环素)联用对XDRAB浮游状态下和生物被膜状态下的协同抗菌效应;研究3种中药单体(黄芩苷、盐酸小檗碱、槲皮素二水物)和4种抗菌药物(亚胺培南、美罗培南、多粘菌素B、替加环素)对XDRAB生物被膜形成能力的影响,并探讨以上组合用药对XDRAB的协同抗生物被膜效应。方法1.参照CLSI2020标准,选择鲍曼不动杆菌ATCC19606、金黄色葡萄球菌ATCC29213、大肠杆菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853为质控菌株,采用微量肉汤稀释法测定碳青霉烯类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、多粘菌素类等17种抗菌药物对临床分离鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)。2.运用多位点序列分型方法(MLST)和肠杆细菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)分型方法对XDRAB进行分型检测并分析其流行病学特征。3.比浊法测定5种肽类抗生素(多粘菌素B、多粘菌素E、万古霉素、杆菌肽、替考拉宁)、3种中药单体(黄芩苷、盐酸小檗碱、槲皮素二水物)、4种抗菌药物(亚胺培南、美罗培南、替加环素、多粘菌素B)在1MIC、1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC对XDRAB 24h内的生长情况,选取综上不抑制细菌生长的浓度作为后续实验的工作浓度。4.采用结晶紫染色法测定鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力。研究5种肽类抗生素在工作浓度下对XDRAB生物被膜形成能力的影响;棋盘结晶紫染色法研究中药单体联合抗生素对XDRAB的协同抗生物被膜效应。5.菌落平板计数法测定5种肽类抗生素在工作浓度下对XDRAB粘附性的影响。6.采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(q RT-PCR)研究5种肽类抗生素在工作浓度下对XDRAB的生物被膜形成相关基因(aba I,omp A,bfm R,bfms,csu E,pga A)的表达情况。7.微量棋盘稀释法和部分抑菌浓度指数(Fractional inhibitory concentration index,FICI)、生物被膜抑制分数浓度(Fractional biofilm inhibitory concentration,FBIC)评价5种肽类抗生素分别联合5种其他抗菌药物(亚胺培南、美罗培南、替加环素、阿奇霉素、利福平)对XDRAB浮游状态和生物被膜状态下的协同抗菌效应。结果1.45株临床分离鲍曼不动杆菌分布科室主要以重症医学科(17株,37.7%)、呼吸科重症监护病区(16株,35.5%)为主;参照美国临床实验室标准化协会(CLSI2020)标准,共检测出XDRAB 37株,占比80%以上;多重耐药株8株,占比17.7%;45株鲍曼不动杆菌对17种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)结果,左氧氟沙星中介率为8.9%,米诺环素敏感率为8.9%,多粘菌素类药物敏感率为86.7%,中介率为13.3%,对替加环素敏感率为100%,对其余抗菌药物均耐药。2.37株XDRAB均属于国际克隆组IC2的克隆复合体(CC92),其中34株为ST208,其次为ST195和ST368,ERIC-PCR分型结果显示,37株XDRAB分为两种类型,其中I型(22株),II型(15株)。3.45株临床分离鲍曼不动杆菌中,具有生物被膜形成能力的菌株37株(泛耐药菌株30株,多重耐药菌株7株),占比82.2%,其中37株XDRAB按照生物被膜形成能力分别为:强阳性(4株)、中阳性(7株)、弱阳性(19株)、阴性(7株)。4.5种肽类抗生素(多粘菌素B、多粘菌素E、万古霉素、杆菌肽、替考拉宁)分别在0.25μg/m L、0.25μg/m L、8μg/m L、8μg/m L、8μg/m L的浓度下显著抑制XDRAB生物被膜的形成(P多粘菌素B万古霉素替考拉宁杆菌肽;5种肽类抗生素在工作浓度下对XDRAB的粘附能力有不同程度的抑制作用(P替考拉宁多粘菌素B杆菌肽万古霉素;5种肽类抗生素在工作浓度下对XDRAB生物被膜形成相关基因(aba I、omp A、bfm R、bfm S、csu E、pga A)的表达均具有