姜黄素靶向SPAG5调节Wnt/β-catenin信号通路抑制肝癌的分子机制研究

作     者：李慧洋 

作者单位：湖南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：任碧琼

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：SPAG5 姜黄素 肝癌 Wnt/β-catenin通路 

摘      要：目的:验证SPAG5在肝癌细胞系和肝癌患者癌组织中的表达,探讨姜黄素对SPAG5表达、肝癌细胞功能的影响,以及Wnt/β-catenin通路的影响。方法:采用TCGA数据库分析SPAG5在人类癌组织中的表达情况;细胞免疫荧光、免疫组织化学、Western Blot、RT-qPCR实验验证SPAG5在肝癌细胞系Huh7及HCCLM3以及肝癌患者癌组织中的表达;CCK8实验证明姜黄素对细胞生长的影响,并通过划痕实验观察姜黄素对肝癌细胞迁移的影响;细胞转染技术转染敲低和过表达SPAG5质粒,验证姜黄素对SPAG5的调控;Western Blot以及流式细胞术实验验证姜黄素处理对SPAG5及Wnt/β-catenin通路的影响。结果:***数据库显示,与正常组织相比,SPAG5在肝癌组织中的表达显著增强(P0.001);2.免疫组化结果显示,肝癌患者癌组织中SPAG5呈现高表达,癌旁组织不表达或低表达;3.细胞免疫荧光结果显示,Huh7细胞中表达SPAG5,而正常肝细胞MIHA中不表达SPAG5;***-qPCR结果显示,在Huh7、HCCLM3中SPAG5mRNA水平的表达分别是MIHA中的2.8倍和2倍;*** Blot结果显示,正常肝细胞MIHA细胞中的SPAG5蛋白相对表达量为(1.546±0.286),肝癌细胞系Huh7细胞和HCCLM3细胞中SPAG5 的蛋白相对表达量分别为(3.267±0.546),(4.650±0.375),(P0.01,P0.001);***8实验结果显示,姜黄素能显著抑制Huh7和HCCLM3细胞的增殖;7.细胞划痕实验结果表明,以一定浓度姜黄素作用于Huh7和HCCLM3细胞,能明显抑制细胞的迁移(P0.01,P0.001);*** Blot结果显示姜黄显示素抑制Huh7细胞SPAG5的表达,并呈浓度依赖关系;9.姜黄素使两个肝癌细胞株中CyclinD1的蛋白水平表达减弱(P0.001,P0.01),与未处理的肝癌细胞株相比,过表达SPAG5后姜黄素对SPAG5和CyclinD1的表达均有抑制作用(P0.05,P0.0001),敲低SPAG5后姜黄素对SPAG5和CyclinD1的表达也有抑制作用(P0.05,P0.01),并且使肝癌细胞凋亡增加(P0.0001,P0.0001),β-catenin 蛋白水平表达减弱(P0.05)。结论:***5在肝癌组织和肝癌细胞中均呈现高表达;2.姜黄素能抑制SPAG5的表达,并且能抑制肝癌细胞的增殖和迁移,促进肝癌细胞的凋亡;3.姜黄素靶向SPAG5调节Wnt/β-catenin信号通路抑制肝癌。