蛇床子素延缓大鼠髓核细胞退变的体外实验研究

作     者：金禹同 

作者单位：辽宁中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姚啸生

授予年度：2023年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：蛇床子素 大鼠髓核细胞 体外实验 自噬 

摘      要：目 的:1.观察蛇床子素对IL-1β诱导的大鼠NPCs退变模型的作用。2.探究蛇床子素在延缓大鼠NPCs退变过程中的机制及部分揭示独活寄生汤治疗IDD的潜在生物学机制。材料与方法:将大鼠NPCs常规培养至第三代后进行预实验:①应用CCK-8法筛选IL-1β诱导大鼠NPCs退变造模的最佳浓度、时间。应用最佳浓度的IL-1β用最佳时间诱导大鼠NPCs退变,并用Western blot法验证大鼠NPCs的退变模型。②筛选蛇床子素干预IL-1β诱导的大鼠NPCs退变模型的最佳浓度和时间。随后进行正式试验,将退变大鼠NPCs退变模型分为3组:空白对照组、模型对照组、蛇床子素组并应用蛇床子素标准品等相应药物进行干预,应用CCK-8法检测大鼠NPCs的增殖能力,并应用Western blot法检测各组中Aggrecan与Beclin-1的蛋白表达水平情况及采用ELISA法检测Ⅱ型胶原蛋白与MMP-3的表达水平。结 果:1.IL-1β诱导大鼠NPCs退变的最佳浓度与时间预实验:①CCK-8法:相比于5、20μg/L浓度的IL-1β,经10μg/L浓度IL-1β诱导24h的大鼠NPCs的细胞增殖率达到最低值,差异具有统计学意义(P0.05)。②Western blot法:模型组中大鼠NPCs中MMP-3蛋白表达呈明显上调趋势差异具有统计学意义(P0.05)。2.蛇床子素干预浓度与时间预实验:CCK-8结果表明,蛇床子素药物浓度达到25μM的剂量时,在干预IL-1β诱导退变的大鼠髓核细胞36h后,较之25、50、100μM浓度的蛇床子素能够更为有效的恢复其增殖活力。3.蛇床子素对IL-1β诱导退变的大鼠NPCs的影响:①CCK-8法:相较于空白组与模型组,蛇床子素组干预后的大鼠NPCs的增殖活力最佳差异具有统计学意义(P0.05)。②ELISA法检测Ⅱ型胶原蛋白与MMP-3的表达水平:模型组与空白组比较,Ⅱ型胶原蛋白的表达明显下降,MMP-3的表达水平明显升高差异具有统计学意义(P0.05);相比于模型组,蛇床子素组的Ⅱ型胶原蛋白的表达呈逐渐升高的趋势,而MMP-3的表达呈较明显的下降趋势,差异具有统计学意义(P0.05);相比于空白组,蛇床子素组的MMP-3的表达升高,差异具有统计学意义(P0.05),Ⅱ型胶原蛋白的蛋白表达呈逐渐下降的趋势,差异具有统计学意义(P0.05)。③Western blot法检测蛇床子素对Aggrecan与Beclin-1蛋白表达水平情况:与空白组比较模型组Aggrecan的蛋白表达呈明显下降趋势,差异具有统计学意义(P0.05),Beclin-1的蛋白表达呈升高的趋势,差异具有统计学意义(P0.05);相比于模型组,蛇床子素组Aggrecan的蛋白表达呈明显升高的趋势,差异具有统计学意义(P0.05),Beclin-1的蛋白表达呈明显升高的趋势,差异具有统计学意义(P0.05);相比于空白组,蛇床子素组Aggrecan的蛋白表达呈下降趋势,差异具有统计学意义(P0.05),Beclin-1的蛋白表达呈明显升高的趋势,差异具有统计学意义(P0.05)。结 论:1.预实验结果表明,10μg/L浓度的IL-1β是干预大鼠NPCs退变的最佳浓度,1L-1β能够成功诱导大鼠NPCs的退变,成功复制大鼠NPCs的退变模型。2.蛇床子素能够抑制因IL-1β诱导的大鼠NPCs的退变,其发挥作用的机制可能与调控自噬有关。