广西瑶鸡产蛋特征分析及相关分子标记开发

作     者：董佳佳 

作者单位：河南农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘小军

授予年度：2023年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：广西瑶鸡 产蛋量 分子标记 PHIP 

摘      要：广西瑶鸡为我国著名地方鸡品种,因其肉质结实细嫩、抗病力强、耐粗饲、瘦肉多、皮下脂肪少,深受消费者青睐。然而,与大多数地方鸡品种类似,广西瑶鸡也存在产蛋性能较低的缺点,限制了产业化发展。为了揭示广西瑶鸡产蛋性状的特性、筛选与产蛋性能相关的分子标记,本研究以产蛋高峰期广西瑶鸡为研究对象,通过血清激素指标测定、卵巢功能分析,结合课题组前期在地方鸡中筛选出的与产蛋性状相关的候选位点,鉴定出在广西瑶鸡中与产蛋性能相关的关键位点,并进一步对该位点所在基因PHIP的生物学功能进行了研究,主要研究结果如下:1.广西瑶鸡产蛋性状的特征采集1050只从开产至41周龄广西瑶鸡的产蛋数据,测定30周时高低产个体的血液生化指标;随机挑选高低产母鸡各20只,称其活重,测定屠宰后卵巢总重及卵泡发育等指标。对产蛋性状和血液激素水平进行相关性分析。结果表明:(1)广西瑶鸡的产蛋量性状的表型变异较大,其连产长度与大多数阶段的产蛋数呈显著正相关;(2)30周时高产组的雌激素(E2)、促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)均显著高于低产组(P0.05);(3)高产蛋鸡的小黄卵泡和大白卵泡显著高于低产蛋鸡(P0.05),低产鸡的各等级卵泡数量显著高于高产蛋鸡(P0.05),等级卵泡的等级紊乱;(4)21-30周产蛋数与FSH、LH和E2呈显著正相关(P0.05),FSH与E2呈显著正相关(P0.05),LH、E2分别与小白卵泡呈负相关(P0.05)。2.广西瑶鸡产蛋量性状相关分子标记的筛选与鉴定结合课题组前期的研究基础,筛选出与地方鸡产蛋量性状相关的23个位点,通过PCR和测序分析,在瑶鸡中筛选到5个共有位点,采用线性混合模型分析不同基因型与产蛋数之间的关系,用单因素方差分析和LSD检验研究基因型对鸡产蛋的影响。结果显示:5个位点均与不同的产蛋量性状显著相关,其中SCFD2上rs65806397和PHIP上rs79584289位点与不同时期产蛋量显著相关。检测SCFD2和PHIP在性腺轴(HPG)中的表达后发现,PHIP在高产组的卵巢和垂体中表达量显著高于低产组,且AA基因型的表达量显著高于AG和GG(P0.05)。PHIP上rs79584289位点可作为广西瑶鸡产蛋量相关的分子育种标记,AA基因型优势基因型。***对鸡卵巢颗粒细胞的调控作用合成相应的干扰片段,转染体外培养的颗粒细胞20-24小时后收集细胞和上清液,用q PCR检测细胞相关基因的表达水平;使用ELISA试剂盒检测细胞上清液中雌二醇(E2)、孕酮(PROG)的激素水平;使用CCK-8检测其对细胞增殖的影响。结果表明,干扰PHIP基因可显著增强颗粒细胞标志基因FSHR和BMP15的表达(P0.01),促细胞增殖标记基因CDK1、CDK2、TP53表达显著下调(P0.05),显著增强凋亡标记基因Casepase9的表达(P0.05),同时显著增强分化标记基因GDF9的表达(P0.05),也可以促进分化标记基因PCNA的表达,但不显著。干扰PHIP的细胞上清液中E2和PROG的含量低于对照组,显著抑制颗粒细胞PROG的合成和分泌(P0.05)。综上,PHIP基因可以促进卵巢颗粒细胞增殖,抑制其分化和凋亡,促进PROG的合成分泌。