热休克蛋白90对高糖环境下Müller细胞活性的影响及其机制研究

作     者：余豆豆 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈晓

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：Müller细胞 热休克蛋白90 程序性坏死通路 NF-κB和MAPK通路 RIP1泛素化 

摘      要：研究目的构建大鼠视网膜Müller细胞体外高糖模型,探索高糖环境下热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)对Müller细胞活性的影响及其机制研究。研究方法采用浓度为105mmol/L的葡萄糖模拟体外高糖环境,培养大鼠视网膜Müller细胞,将细胞分为4组:对照组(105mmol/L葡萄糖)、空载病毒组(未携带HSP90基因的腺相关病毒转染细胞+105mmol/L葡萄糖)、HSP90过表达组(携带HSP90基因的腺相关病毒转染细胞+105mmol/L葡萄糖)和HSP90抑制组(浓度为0.1 μmol/L的17-AAG预处理细胞1h+105mmol/L葡萄糖)。通过CCK8法和EdU法检测各组Müller细胞的活力及增殖能力;流式细胞术测定细胞周期比例;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测程序性坏死通路关键蛋白RIPK1、RIPK3、MLKL的表达及增殖信号通路关键蛋白NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38 MAPK、p-p38 MAPK的表达;免疫共沉淀法(Co-IP)检测调控增殖通路关键因子RIP1的泛素化水平。研究结果与对照组比较,CCK8和EdU结果显示,HSP90过表达组Müller细胞增殖活力降低,HSP90抑制组增殖活力增加;细胞周期结果显示,HSP90过表达组Müller细胞的G2期比例降低,G1期比例增高,HSP90抑制组S期和G2期比例增加;Western Blot结果显示,HSP90过表达组RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白的表达增加,NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达降低,而 HSP90抑制组 RIPK1、RIPK3、MLKL 蛋白的表达降低,NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达增加;Co-IP结果显示,HSP90过表达组RIP1的泛素化水平降低,HSP90抑制组RIP1的泛素化水平增加。空载病毒组与对照组比较,各检测指标均无统计学差异。研究结论在高糖环境下,过表达HSP90可能通过激活Müller细胞程序性坏死通路,抑制细胞增殖信号通路,从而促进细胞凋亡。反之抑制HSP90可能通过抑制程序性坏死通路,激活细胞增殖信号通路,促进细胞发生增殖,其潜在的机制可能与HSP90调控RIP1泛素化水平有关。