基于HSP家族调控的细胞凋亡探究育子方改善弱精症的临床观察及实验研究

作     者：何沁奕 

作者单位：云南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：袁卓珺

授予年度：2023年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：弱精症 细胞凋亡 HSP家族 育子方 

摘      要：目的:本研究通过临床观察以评估育子方对弱精子症患者的临床疗效,同时基于HSP家族所调控的细胞凋亡为切入点,采用弱精症病理模型大鼠为实验研究对象进行动物实验,检测不同剂量育子方对大鼠睾丸组织中HSP70、HSP90、HSP105的m RNA和蛋白的表达情况,旨在初步探索育子方改善精子活动力的细胞凋亡机制。方法:1按纳入标准纳入肾虚血瘀型弱精症患者64例,并随机数字均分为对照组32例和治疗组32例,治疗组予中药育子方加口服维生素E软胶囊治疗,对照组予口服维生素E软胶囊治疗。3个月为1个疗程,分析观察治疗前和治疗后两组患者的中医证候积分、精液质量分析等相关指标变化。2采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡率、Real-time PCR法和Western Blot法检测不同剂量育子方对大鼠睾丸组织中HSP70、HSP90、HSP105的m RNA和蛋白的表达情况。结果:1临床研究按照纳入、剔除、脱落及终止标准,根据临床疗效评价标准,本研究有效病例56例,按照随机分组法分为对照组和治疗组,各28例,其中治疗组年龄22～50岁,平均年龄(33.29±6.24)岁,对照组年龄23～47岁,平均年龄(33.18±5.89)岁。治疗后患者精液分析结果示,与治疗前相比,治疗组和对照组PR、PR+NP比较均有显著不同(P0.05)。空白组、育子方低、中、高剂量组与模型组相比大鼠精子总活力存在显著性差异(P0.05)。2.2育子方对生精细胞凋亡率的影响经TUNEL染色后发现,模型组生精细胞凋亡率明显高于空白组(P0.05)。2.3WB法检测HSP70、HSP90、HSP105蛋白表达根据检测结果可知,育子方低、中、高各剂量组中均有HSP70、HSP90、HSP105蛋白的表达,经过育子方中药灌胃治疗后,空白组大鼠睾丸组织中HSP70、HSP90、HSP105蛋白的表达量最高,育子方低、中、高剂量组HSP70、HSP90、HSP105蛋白的表达量均大于模型组。与模型组相比,空白组、中剂量组、高剂量组中HSP70、HSP90蛋白的表达量均显著增加(P0.05)。与模型组相比,空白组、低剂量组、高剂量组中HSP105蛋白的表达量均增加(P0.05)。2.4 PCR法检测HSP70、HSP90、HSP105m RNA表达根据检测结果可知,经过育子方中药灌胃治疗后,HSP70、HSP90、HSP105m RNA表达量在空白组大鼠睾丸组织中最高;育子方低、中、高剂量组的表达量均大于模型组。各组大鼠睾丸组织中高剂量组的HSP70、HSP90、HSP105m RNA的表达量均与模型组存在显著性差异(P0.05)。结论:育子方可以有效提高精子活动力。其可能是通过促进HSP70、HSP90、HSP105蛋白的生成,以抑制生精细胞的凋亡,从而提高大鼠睾丸组织的精子活动力,这可能是育子方发挥治疗作用的关键点之一。