秋菊丸抗高尿酸血症的药效及机理研究
作者单位：新疆医科大学
学位级别：硕士
导师姓名：斯拉甫·艾白;李治建;哈木拉提·哈斯木
授予年度：2023年
学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床]
摘 要：目的:本研究在完成秋菊丸(Qiujuwan,QJW)初步制备工艺及化学成分分析的基础上,以小鼠急性高尿酸血症(Hyperuricemia,HUA)模型为研究对象,初步探讨QJW的降尿酸(uric acid,UA)及肾保护作用。借助网络药理学方法获得QJW抗HUA的关键基因,进而预测QJW抗HUA及肾损伤的作用机制,并通过大鼠慢性HUA模型实验,进一步验证QJW抗HUA过程中关键基因的表达,以期研究QJW抗HUA及肾脏保护的作用及作用机制,为其临床应用提供实验依据。方法:(1)借助超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)技术,初步鉴定QJW的化学成分并通过显色法测定其主要药效成分总黄酮的含量。(2)将48只健康雄性昆明小鼠,随机分成空白组(10 m L·kg纯水),模型组(10m L·kg纯水),QJW低(0.59 g·kg·d)、中(1.18 g·kg·d)、高(2.36 g·kg·d)剂量组,别嘌醇组(0.063 g·kg·d),每组各8只。每日给药1次,连续14天,在实验的第14天,给予药物1小时后,除空白组之外,其余各组的小鼠i.p.氧嗪酸钾(450 mg·kg)联合ig.次黄嘌呤(500 mg·kg)建立急性HUA模型。以小鼠体重、肾脏系数、UA、尿素氮(BUN)、腺苷脱氨酶(ADA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRPS)、磷酸核糖焦磷酸酰基转移酶(PRPPAT)、组织病理学的变化为评价指标研究QJW抗急性HUA作用。(3)基于网络药理学,借助TCMSP等数据库、文献检索查找QJW的有效活性成分并用Swiss Target Prediction、Gene Cards数据库预测其治疗HUA的作用靶点。联合Uni Prot、STRING数据库及Cytoscape软件构建出PPI网络,再利用DAVID数据库进行GO功能、KEGG通路的富集分析。(4)将48只SD大鼠(雄性)随机分为以下六组:空白组(10 m L·kg纯水),模型组(10 m L·kg纯水),QJW低(1.31 g·kg·d)、中(2.62 g·kg·d)、高(5.24 g·kg·d)剂量组,阳性药组(苯溴马隆,5.45 mg·kg·d)。除空白组外,其余各组动物每天上午以10m L·kg的剂量ig.腺嘌呤(100 mg·kg)和乙胺丁醇(250mg·kg)造慢性HUA模型,下午给予药物,共28天。测定UA、肌酐(CRE)、BUN等生化指标,HE及Masson染色观察肾脏组织病理学变化,PCR法检测肾脏组织中葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)、有机阴离子转运体家族蛋白3(OAT3)、ATP结合盒亚家族G成员2(ABCG2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、SMAD蛋白3(Smad3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的基因水平。结果:(1)QJW中共鉴定出41个成分,其中黄酮类成分占比较高,含量为67.34 mg·m L。(2)与空白组比较,模型组肾脏系数、UA、BUN、ADA明显升高(P0.05),肝脏XOD、PRPS、PRPPAT活性显著升高(P0.05)。与模型组比较,QJW各剂量组均能够明显降低肾脏系数、UA、BUN、ADA的水平及肝脏XOD、PRPS、PRPPAT的活性(P0.01),改善肾脏组织病理损伤。(3)通过网络药理学预测QJW可能通过木犀草素、鞣花酸、二羟基黄酮、花生四烯酸、诃子次酸、β-谷甾醇等活性成分以及关键靶点TGF-β1,TP53,TNF和IL-1β等发挥抗HUA作用,其作用机制可能涉及AGE-RAGE、TNF和IL-17等信号通路。(4)给药28天后,与模型组相比,QJW各组血清UA、BUN、ADA显著降低(P0.05),肾组织中的胶原纤维明显减弱(P0.05),QJW各组及苯溴马隆组的OAT3、ABCG2的mRNA水平均显著升高(P0.05),QJW中、高剂量组及苯溴马隆组GLUT9、α-SMA、TGF-β1 mRNA的水平显著降低(P0.05或P0.01),各给药组Smad3的mRNA水平有降低趋势,但无显著性差异。结论:本研究首次使用液质联用技术对QJW的化学成分进行分析,结果显示,黄酮类、苯丙素类是QJW的主要组成部分,其中黄酮类化合物数量占比最高,通过显色法测定QJW中总黄酮的含量为67.34 mg·g。小鼠急性HUA实验结果显示,QJW能降低HUA小鼠UA水平的同时对小鼠尿酸性肾损伤有一定的改善作用。网络药理学预测结果显示,QJW可能通过木犀草素等活性成分以及关键靶点TGF-β1发挥抗HUA的作用,机制可能涉及AGE-RAGE信号通路。大鼠慢性HUA模型验证实验结果提示,QJW可能通过调控尿酸转运体GLUT9、OAT3及ABCG2的mRNA表达来降低UA水平;通过改善肾功能参数、组织病理学损伤、减轻肾纤维化来起到一定的肾脏保护作用,其机制可能与QJW通过AGE-RAGE信号轴下调TGF-β1、α-SMA、smad3的mRNA表达有关。
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