TRIM26抑制乙型肝炎病毒复制及其基因多态预测慢性乙型肝炎患者干扰素治疗应答

作     者：罗梦琪 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：蒋德科

授予年度：2022年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：乙型肝炎病毒(HBV) 慢性乙型肝炎 TRIM26 HBx 干扰素 

摘      要：研究背景和目的乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是一个严重的全球性健康问题,HBV感染患者发展为慢性乙型肝炎(Chronichepatitis B,CHB)、肝纤维化、肝硬化甚至肝细胞癌的风险较高。目前推荐用于治疗HBV感染的有两大类药物,包括核苷(酸)类似物(Nucleos(t)ide analogues,NAs)和干扰素(Interferon,IFN)。但由于HBV基因组可与宿主基因发生整合以及共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA,cccDNA)的存在,目前 HBV 感染很难完全治愈。作为一种E3泛素化酶,干扰素刺激基因(IFN-stimulated gene,ISG)TRIM26已被证实影响丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)复制,因而本研究想探究TRIM26对HBV复制的影响。研究方法通过免疫印迹实验(Western blot,WB)验证Huh7、HepG2、HepAD38和HepG2.2.15 细胞中 TRIM26 的表达。然后在 HepAD38、HepG2.2.15 和 HBV 感染的HepG2-NTCP细胞中敲低或过表达TRIM26,探究TRIM26对HBV复制的影响。随后用免疫共沉淀和免疫印迹实验证实了 TRIM26与HBV结合的具体片段以及TRIM26与HBV之间相互作用的特异性机制。最后利用两个共含945名接受聚乙二醇干扰素α(Pegylated interferon alpha,PegIFN-α)治疗的慢性乙型肝炎患者的独立队列评估TRIM26s116806878与干扰素治疗应答的关系。研究结果***26在Huh7和HepG2细胞中的表达明显高于HepAD38和HepG2.2.15细胞,因而猜测HBV感染可能抑制TRIM26表达。2.在Huh7和HepG2细胞中通过外转HBV1.3质粒证实HBV感染可抑制TRIM26表达。3.在 HepAD38、HepG2.2.15 和 HBV 感染的 HepG2-NTCP 细胞中敲低TRIM26后HBV复制增强,反之,过表达TRIM26后HBV复制减弱。4.免疫共沉淀证实TRIM26可与HBx结合,细胞免疫荧光也证实TRIM26和HBx在细胞质中存在共定位。进一步机制研究表明TRIM26通过其SPRY结构域与HBx发生结合并介导HBx泛素化降解从而抑制HBV复制。5.人重组干扰素α、β和γ刺激Huh7和HepG2细胞使TRIM26的mRNA和蛋白水平均表达增加。6.临床队列的分析显示TRIM26s116806878与PegIFN-α治疗的慢性乙型肝炎患者的应答显著相关,具体体现在HBeAg血清学转换和HBV DNA水平的改变。7.通过整合TRIM26s11680878、STAT4s7574865 和 CFBs12614 构建的乙肝多基因评分(Polygenic score,PGS),能更好地预测PegIFN-α治疗的慢性乙型肝炎患者的应答情况。研究结论TRIM26的过度表达可抑制HBV复制,干扰素可促进TRIM26的表达。TRIM26通过促进泛素化介导的HBx降解对HBV复制产生抑制作用。TRIM26s11680878是PegIFN-α治疗的慢性乙型肝炎患者是否发生应答的预测生物标志物。这可能为HBV治疗和临床用药策略提供新的参考。