β受体阻滞剂调控TLR4炎症通路减轻脓毒症大鼠心肌损伤的机制研究

作     者：迪丽热巴·吐尔逊 

作者单位：新疆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：于湘友

授予年度：2023年

学科分类：100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：脓毒症 脓毒症心肌损伤 β受体阻滞剂 Toll样受体4 髓样分化蛋白88 核因子-κB TLR4抑制剂 艾司洛尔 炎症 

摘      要：目的探讨β受体阻滞剂(艾司洛尔)对脓毒症大鼠的心肌保护作用及对Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)炎症通路的影响。方法筛选Wistar雄鼠60只,随机性的将它们分成假手术(Shame)组、脓毒症(CLP)组、艾司洛尔(CLP+ES)组、TLR4抑制剂(CLP+TAK-242)组,每组分别是15只。CLP组、CLP+ES组以及CLP+TAK-242组引入盲肠结扎穿孔法(Cecal ligation and puncture,CLP)的方式确定其脓毒症模型,而Shame组则给予盲肠探查术介入;CLP+ES组于CLP术后12h给予腹腔注射艾司洛尔稀释液20mg/kg;同期,针对CLP+TAK-242组进行腹腔注射TAK-242 3mg/kg;余下的两组则主要施以生理盐水观察。CLP组与Shame组于术后14-16小时内检测心脏多普勒超声,数据采集完毕后各组均于术后24小时经腹主动脉采血离心后置于-80℃保存,同时处死大鼠,立即采集心脏组织并处理标本。取大鼠心肌组织进行苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE),观察心肌组织病理学改变;结合免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)分析心肌内的TLR4、髓样分化蛋白88(Myeloid differentiation factor88,My D88)以及核转录因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)的特异性表达情况,之后结合马松染色(Masson染色)的方式分析心肌内纤维化表现;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blot,WB)检测TLR4、My D88、NF-κB以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Aspartic acid specific cysteine protease 1,caspase-1)表达情况,引入免疫酶联免疫吸附技术(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)通过采取腹主动脉血来确定血清心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin-I,c Tn-I)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)等炎症指标的具体含量。结果CLP组大鼠的左室舒张期末容积(Left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)和左室收缩期末容积(Left Ventricular End-systolic volume,LVESV)明显高于Shame组(均P0.05),而左室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)和左室短轴缩短率(Left ventricular fractional shortening,LVFS)显著低于Shame组(均P0.05),说明发生脓毒血症时会引心功能的障碍。与Shame组相比,CLP组心肌病理损伤、纤维化以及炎症细胞浸润明显加重,心肌损伤指标c Tn-I与炎症介质TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显升高(均P0.05);和CLP组对比,CLP+ES组以及CLP+TAK-242组内的心肌受损程度要明显减轻,炎症递质相对更低(均P0.05)。Western blot分析得出,CLP组别中测得的心肌内的TLR4、My D88、NF-κB与caspase-1各项表达情况全部都显著的高于Shame组(均P0.05),另外CLP+ES组以及CLP+TAK-242组内的四类蛋白的表达效果与CLP组对比明显减低(均P0.05)。结论β受体阻滞剂可通过阻断TLR4信号通路介导的炎症反应来减轻脓毒症大鼠心肌损伤及抑制炎症介质的表达。