针刺远、近端穴位干预肌筋膜疼痛综合征大鼠的外周镇痛机制研究
作者单位：福建中医药大学
学位级别：硕士
导师姓名：廖军
授予年度：2023年
学科分类：1005[医学-中医学] 100512[医学-针灸推拿学] 10[医学]
摘 要：目的观察远、近取穴对肌筋膜疼痛综合征(Myofascial pain syndrome,MPS)大鼠模型致痛物质P物质(Substance P,SP)、降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide,CGRP)及巨噬细胞、炎症因子的调控作用,对比远、近取穴干预肌筋膜疼痛综合征的外周镇痛机制。方法选用24只健康雄性SD大鼠(SPF级,7周龄,体重200±20g),随机分为空白组、模型组、近端取穴组(以下简称近端组)、阳陵泉加阴陵泉组(以下简称远端组),每组6只。模型组、近端组、远端组大鼠采用“打击结合离心运动方式制备慢性MPS模型。具体方法为:实验第1天,使用动物气体麻醉机将大鼠在4%异氟烷诱导下吸入性麻醉,之后将异氟烷浓度调整为2%,自制打击器打击大鼠右下肢股内侧肌1次,动能为2.352J,后放回笼中正常饲养;实验第2天,令大鼠于-16°的电动跑台上以16m/min速度持续性下坡跑90min,以电击和小棒进行驱赶;其余5天正常喂养,不做干预。每周干预1次,持续干预8周,为干预期;此后正常饲养4周,不做任何处理,为恢复期。造模完成后,近端组大鼠寻找激痛点,采用0.30mm×25mm毫针斜刺并贯穿激痛点结节,提插、捻转引发局部抽搐反应后,连接韩式电针仪,施以频率2/100Hz、电压2-4V的疏密波,电流强度以大鼠右下肢出现轻微颤动为宜,治疗15min,每日1次,连续治疗14天。远端组大鼠针刺右下肢阳陵泉穴加阴陵泉穴,余同近端组;空白组、模型组大鼠在相同时间和地点采取相同方式进行抓取和固定,而不采取任何治疗措施。分别在造模前、造模后、干预后对所有大鼠进行机械性痛阈值测定、肌骨超声影像学检测;干预后对4组大鼠进行肌电检测。取大鼠右下肢股内侧肌采用HE染色法观察肌肉形态学变化;免疫荧光组织化学法观察肌肉组织中SP、CGRP、M1型巨噬细胞标记物CD68、M2型巨噬细胞标记物CD206的阳性表达;酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中血清中白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、白细胞介素8(Interleukin-8,IL-8)含量。结果***检测机械缩足反射阈值造模前,各组大鼠机械缩足反射阈值无明显差异;造模后,各组大鼠机械缩足反射阈值与空白组比较均显著降低(P0.05);干预后,远端组与近端组大鼠与模型组比较机械缩足反射阈值显著提高(P0.05),但近端组比远端组更为显著。2.小动物肌骨超声仪检测肌组织形态肌骨超声显示,造模前各组大鼠肌肉形态完整、无断裂、无扭曲,轮廓清晰,肌纤维排列有序;造模后模型组大鼠较空白组大鼠肌纤维断裂、扭曲、变形,排列紊乱,轮廓不清晰;干预后远端组和近端组大鼠肌纤维排列相对有序、断裂、变形、扭曲减少,但两组形态对比无明显差异。3.肌肉电生理检测仪检测MTr Ps处肌肉电生理触摸股内侧肌击打位置及其附近肌肉,确定激痛点的位置,将2根细针电极插入激痛点结节(参考电极插入右侧股内侧肌),两针旁开1-2cm记录静息状态下的肌电信号2分钟。肌电检测结果显示静息状态下空白组无自发性放电;模型组出现高频高幅的电位,且持续时间较长;近端组自发性放电频率与幅度明显低于模型组;远端组出现高频低幅的背景电位和高幅低频的锋电位。***染色法检测肌组织形态学改变(1)股内侧肌水平切空白组:肌细胞形态呈规则多边形,大小相对均匀,肌原纤维排列紧密,细胞核均位于肌膜下,着色均匀,排列有序,无细胞核聚集现象,无明显炎性细胞浸润,未见血细胞;模型组:肌细胞形态不规则,排列松散无规律,肌间隙不规则增宽,结构混乱,细胞明显增大、变圆,核内移且大小不均匀,着色较深,有多处核聚集现象,有明显炎性细胞浸润,可见少量血细胞;近端组:肌细胞形态恢复规则多边形,大小相对均匀,肌间隙相对紧密,结构较清晰,细胞核位于肌膜下,无明显内移、聚集现象,核的大小、着色相对均匀;远端组:肌细胞形态恢复规则多边形,大小相对均匀,肌间隙相对紧密,但较近端组排列松散,细胞核位于肌膜下,无明显内移,有轻微细胞核聚集现象,细胞核仍深染。(2)股内侧肌冠状切面空白组:肌纤维排列整齐、连续,纤维粗细相对均匀,细胞核呈线状均匀排列在肌纤维之间,未见炎性细胞浸润;模型组:肌纤维排列紊乱、扭曲、断裂,纤维粗细不等,有核聚集现象;近端组:肌纤维排列相对整齐,无明显肌纤维断裂,纤维粗细相对均匀,无炎性细胞的浸润,但仍有少量细胞聚集现象;远端组:肌纤维排列相对整齐,少
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