秋水仙碱对射血分数保留的心衰的作用

作     者：刘文武 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：彭道泉

授予年度：2022年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：射血分数保留的心衰 舒张功能障碍 秋水仙碱 炎症 抗炎治疗 

摘      要：背景:射血分数保留的心衰(heart failure with preserved ejection fraction,HFp EF)的患病率已经超过射血分数降低的心衰(heart failure with reduced ejection fraction,HFr EF)成为心力衰竭中的主要类型。肾素-血管紧张素-醛固酮系统以及交感神经系统的抑制剂已经被证明对于HFr EF患者具有改善预后的效果,但这些药物对于HFp EF的作用并未在临床试验中得到证实,因此目前对于HFp EF的患者仍缺乏有效的治疗手段。既往研究表明炎症反应在HFp EF的发生中具有重要作用,参与心脏舒张功能障碍的发生。炎症已经成为治疗HFp EF的一个有力靶点。秋水仙碱是一种临床上长期应用的抗炎药物,已被证明能改善心肌梗死患者的预后,降低心衰发生率。因此我们研究探索秋水仙碱治疗HFp EF的作用及机制。目的:本研究拟建立合适的HFp EF小鼠模型,探索秋水仙碱能否通过抑制炎症作用改善心脏舒张功能,为HFp EF的治疗提供新的证据。方法:1、收集中南大学湘雅二医院心血管内科139例确诊为HFp EF患者和108例对照患者的临床数据。通过分析患者的超声心动图数据及临床实验室检查数据,比较两组在超声心动图指标和生化指标之间的差异。2、首先比较12周龄C57BL/6雄性小鼠(WT组,n=5)db/db小鼠(db/db,n=5)的心脏功能,应用HE染色、WGA染色、Masson染色和免疫组织化学染色观察心脏结构、心肌细胞横截面积和心肌纤维化程度,验证其能否作为HFp EF的动物模型。随后将db/db小鼠随机分为2组干预4周:(1)db/db组(n=7):给予与实验组相同体积的缓冲液溶液灌胃;(2)db/db+col组(n=7):给予秋水仙碱1mg/kg/d灌胃。干预4周后进行如下处理:(1)对各组小鼠行超声心动图检查评价心脏功能;(2)检测血清中血糖、血脂、超敏C反应蛋白等各项生化指标;(3)心脏组织切片HE染色、Masson染色及WGA染色并进行VCAM、CD68免疫组化染色比较心脏结构和炎症浸润情况。3、秋水仙碱抑制促炎刺激下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的炎症反应:通过CCK8(cell counting kit 8)实验确定秋水仙碱最佳干预浓度,以TNFα刺激HUVECs炎症表达,并通过q PCR、Western Blot、细胞黏附试验等方法检测HUVECs细胞黏附能力、炎症水平。结果:1、与对照组相比,HFp EF患者血清中NT-pro BNP、超敏C反应蛋白水平升高,提示存在升高的炎症水平。2、本研究证实12周龄db/db小鼠存在舒张功能障碍和升高的炎症水平。与HFp EF患者临床表现相似,可以作为HFp EF动物模型。经过秋水仙碱干预4周后可降低E/e’和E/A(P0.05)。组织染色显示秋水仙碱可降低心肌细胞间巨噬细胞的浸润,减小心肌细胞横截面积,降低纤维化(P0.05)。3、秋水仙碱可以抑制TNFα体外刺激的HUVECs炎症反应,抑制内皮细胞内NLRP3炎症小体活化,增加AMPK磷酸化水平,从而降低内皮细胞炎症水平。结论:秋水仙碱可以改善HFp EF小鼠模型的心脏舒张功能,这种作用通过秋水仙碱对内皮细胞炎症的抑制作用。图12幅,表18个,参考文献61篇