基于PDX肝癌模型的原位注射PD-1敲除T细胞免疫治疗疗效的研究

作     者：罗建伟 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王维

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：PDX模型 基因编辑 Crsipr/Cas9 免疫治疗 PD-1 肿瘤免疫微环境 肝癌 

摘      要：目的:利用肝癌PDX小鼠模型,研究PD-1基因敲除T细胞在肿瘤内注射的治疗疗效。方法:1、利用免疫缺陷小鼠(NCG小鼠)和患者来源的肝癌细胞,建立肝癌异种移植模型(PDX模型)。2、Crispr/Cas9基因编辑技术将健康人T细胞PD-1基因敲除。将PDX肝癌模型分为PD-1敲除基因编辑T细胞治疗组、无基因编辑T细胞治疗对照组和PBS对照组,将编辑后PD-1敲除T细胞注入肿瘤内,对比组分别将无基因编辑T细胞或PBS注射至肿瘤内,比较实验组与对照组PDX模型肿瘤对T细胞治疗的反应。同时为了探究治疗后各组动物模型体内和肿瘤内T淋巴细胞亚群的分布,通过流式细胞术与多重免疫组化分析小鼠外周血、肿瘤、脾脏的T淋巴细胞亚群的比例。结果:经过Crispr/Cas9基因编辑敲除PD-1的T细胞在肝癌PDX模型中能够显著抑制肿瘤增长,其中对照组PBS组在15天达到肿瘤1600mm,无基因编辑T细胞治疗对照组在15天达到1000mm,而PD-1基因敲除编辑T细胞治疗实验组在15天仅达到500mm。除此之外,PD-1基因敲除编辑T细胞治疗后能够使PDX模型动物体内耗竭性的免疫亚群(Treg、PD-1-CD8+、Tim3-CD8+等)表达显著减少,而免疫活化T细胞亚群(HLA-DR、CD69+)与杀伤型T细胞亚群表达显著增多。结论:通过基因编辑敲除PD-1很大程度上改善了T细胞的免疫功能,逆转了PD-1的负性免疫抑制作用,减少T细胞耗竭,提高T细胞对肿瘤的杀伤能力,为探索实体肿瘤的T细胞治疗研究提供了实验基础。图11幅,表4个,参考文献59篇