长链非编码RNA DDX11-AS1在胶质瘤中的表达和功能机制研究

作     者：向子金 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘世坤;彭向东

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：胶质瘤 长链非编码RNA DDX11-AS1 HNRNPC 

摘      要：目的:胶质瘤是一种中枢神经系统恶性肿瘤,发病机制复杂,手术难度大,术后复发率高,目前仍缺乏有效的治疗方法。现在分子诊断标志物表达变化以及它们对肿瘤生物学的影响已在胶质瘤的诊断、分类和更准确的预后中得到应用,挖掘更多、更有效的分子靶点对攻克胶质瘤具有重要意义。长链非编码RNA DDX11-AS1已被证明可促进肿瘤发展,然而,在胶质瘤中的潜在调节作用仍有待分析和阐明。本研究旨在探究长链非编码RNA DDX11-AS1在胶质瘤中的表达和预后情况,明确DDX11-AS1对胶质瘤细胞的生物学功能,并挖掘其潜在的分子机制。方法:1)通过生物信息学分析和q-PCR检测临床样本来鉴定DDX11-AS1在胶质瘤中的表达差异,并进一步分析表达水平与患者生存和其他临床特征的相关性;2)通过构建DDX11-AS1敲低和过表达的胶质瘤细胞模型,采用Transwell实验和伤口愈合实验检测DDX11-AS1对细胞迁移的影响,采用MTT法和克隆形成实验检测对细胞增殖的作用,并使用裸鼠成瘤观察DDX11-AS1在体内成瘤的作用;3)使用CHIRP-MS技术鉴定和Star Base V2.0预测分析筛选DDX11-AS1潜在结合的RNA结合蛋白,并通过RNA免疫共沉淀实验验证结合作用;4)使用Western Blot实验检测下游通路蛋白的表达变化。结果:1)胶质瘤组织中的DDX11-AS1表达水平比正常对照组织样本高,且随着胶质瘤等级增加,表达水平逐渐增加。DDX11-AS1高表达的胶质瘤患者预后比低表达患者预后差,DDX11-AS1表达与患者胶质瘤WHO等级、IDH状态、1p19q缺失和年龄均密切相关;2)DDX11-AS1敲低抑制了胶质瘤细胞增殖和迁移,促进了细胞凋亡,抑制了EMT进程、Wnt/β-catenin和AKT通路;DDX11-AS1过表达促进了胶质瘤细胞增殖和迁移,促进了体内肿瘤的形成,激活了EMT进程、Wnt/β-catenin和AKT通路;3)DDX11-AS1与HNRNPC相互作用并正向调控HNRNPC的表达;HNRNPC在胶质瘤中高表达,且高表达患者预后不良,敲低后抑制胶质瘤细胞增殖和迁移以及EMT进程、Wnt/β-catenin和AKT通路;HNRNPC敲低减弱DDX11-AS1过表达的促细胞增殖、细胞迁移和肿瘤形成作用,并降低了DDX11-AS1过表达对EMT进程、Wnt/β-catenin和AKT通路的激活作用。结论:1)DDX11-AS1在胶质瘤组织中高表达,且DDX11-AS1高表达的胶质瘤患者预后比低表达患者差;2)DDX11-AS1促进了胶质瘤细胞增殖、迁移和体内生长,并激活了EMT进程、Wnt/β-catenin和AKT通路;3)DDX11-AS1与HNRNPC相结合,进而调控下游EMT进程、Wnt/β-catenin和AKT通路来影响胶质瘤发生进程。图17幅,表12个,参考文献81篇