紫檀芪对大鼠周围神经损伤的保护作用

作     者：曾宪琦 

作者单位：承德医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：陈宾

授予年度：2023年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：紫檀芪 自噬 坐骨神经损伤 MPZ 

摘      要：神经损伤是临床上常见、多发病,也是疑难病。一旦周围神经损伤,常常会导致患者有运动或感觉功能障碍甚至导致残疾,给患者带来生活健康难题,同时也造成了巨大的社会压力与经济负担。虽然周围神经的轴突具有损伤后再生的能力,但近年来的一些临床报告和研究表明,即使外科手术的不断发展,患者接受及时的神经修复手术,但是神经功能的恢复,特别是运动功能,仍远远不能令人满意。周围神经损伤后,再生速度相对较慢,人类神经再生速率约为1毫米/天,远端靶肌肉将因长期缺乏神经支配从而萎缩。对于周围神经损伤的治疗,初期人们通过各种方式改良手术方法,尽量修复损伤的神经;对于术后或者不便于手术的患者,通常通过电刺激、针灸、药物(如甲钴胺)等方式促进神经功能的恢复。药物治疗神经损伤通过直接或间接的方式促进神经再生,其中抗炎途径的研究是比较常见的。神经损伤后由于华勒式变性优先于神经再生,神经再生的成功与否在很大程度上取决于华勒式变性的效率。在此过程中雪旺细胞能够通过自噬作用帮助巨噬细胞吞噬髓鞘碎片从而加速神经恢复的过程。因此自噬途径也是促进神经再生的一方面。众多学者通过紫檀芪发现其具备多种生物活性,但是紫檀芪对周围神经的损伤后的神经功能恢复是否具备促进作用和作用机制目前尚不清楚。目的:建立坐骨神经损伤模型,探讨紫檀芪对促进坐骨神经碾压伤后神经功能恢复的机制。方法:选取SD雄性大鼠80只,随机分为假手术组、溶剂对照组、紫檀芪组、自噬抑制剂组。假手术组暴露坐骨神经后缝合肌肉皮肤;溶剂对照组、紫檀芪组、自噬抑制剂组建立大鼠坐骨神经挤压伤模型,术后第1天起,连续7天分别使用等量的10%DMSO溶液(使用生理盐水稀释)、紫檀芪溶液(30 mg/kg,溶剂为10%DMSO溶液)、3-MA溶液(50mg/kg,溶剂为10%DMSO溶液)进行腹腔注射处理。术后第2天取坐骨神经,进行免疫组化观察Ki67表达,观察紫檀芪对雪旺细胞的影响。术后第4天取材,用蛋白免疫印迹实验(Western-blot)检查坐骨神经中MPZ、p62、LC3Ⅱ蛋白的表达水平,观察紫檀对神经损伤后髓鞘和自噬的影响。术后第14天,第28天,对大鼠进行坐骨神经指数(Sciatic function index,SFI)的测定,评估紫檀芪对神经运动功能恢复的影响。称量术后第14天和28天大鼠健侧和术侧三头肌的湿重,根据比值判断各组术侧肌肉萎缩程度。透射电镜观察损伤后第28天的坐骨神经髓鞘厚度和数量判断紫檀芪对神经损伤晚期髓鞘的作用。结果:1.测量大鼠损伤后第14天和第28天的步态分析SFI,结果发现,术后14天紫檀芪组SFI明显高于对照组和自噬抑制组,差别有统计学意义(P0.05),而紫檀芪组和自噬抑制剂组之间结果无显著差异(P0.05)。6.对损伤后28天远端的坐骨神经进行超薄切片,通过电子透射显微镜进行观察统计,紫檀芪组的髓鞘明显厚于溶剂对照组(P0.05)。结论:紫檀芪可促进SD大鼠坐骨神经损伤后神经纤维的再生,改善大鼠坐骨神经损伤后运动功能的恢复速度,这可能是紫檀芪激活自噬,促进雪旺细胞增殖,提高自噬相关蛋白的表达水平,降低损伤后早期髓鞘降解从而发挥神经保护作用。