静磁场辅助复温对低温保存卵巢组织抗氧化损伤影响的研究

作     者：张莉媛 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：赵刚

授予年度：2023年

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 

主      题：静磁场 低温保存 卵巢组织 解冻复苏 氧化损伤 

摘      要：由于环境恶化及生活压力增加等因素影响,乳腺癌、宫颈癌等常见的恶性疾病发生逐年上升,并趋向年轻化。随着筛查体系的不断完善和诊治水平的提高,疾病患者的五年生存率显著提升。但是手术、放化疗等治疗措施,往往会对患者的卵巢功能造成不可逆转的损害,从而引发医源性卵巢功能不全及不孕不育。卵巢组织的低温保存则可以有效解决女性在恶性疾病治疗后出现的生育困难问题,并且是青春期前患者和必须紧急接受治疗患者目前唯一可选择的生育力保存方案。然而,卵巢组织在低温保存中容易遭受氧化应激损伤,这将会进一步影响卵泡的存活和发育,从而降低组织的质量。因此,为了实现卵巢组织高效冷冻保存,减少组织受到的氧化应激损伤是必不可少的。为此,本研究提出了一种通过静态磁场辅助复温的新方法,以增强卵巢组织在冷冻保存过程中的抗氧化能力。本研究中,采用70只6-8周、体重25g左右的SPF级雌性昆明小鼠的卵巢组织,将其随机分为7组:新鲜对照组、常规对流解冻复苏组(控制组)以及5个磁场处理组(10Gs,20Gs,30Gs,40Gs,50Gs)。新鲜组立即进行固定或组织匀浆处理,对照组及磁场处理组则进行常规低温保存冷冻保存至少一周,再按照处理手段进行解冻复苏。经过苏木精-伊红染色观察卵泡形态、天狼星红染色观察组织的胶原纤维含量、免疫荧光法检测增殖和凋亡、透射电镜观察颗粒细胞的微观结构、体内移植发育10天后使用苏木精-伊红染色观察卵泡及微血管、免疫荧光法检测CD 31以及免疫组化法检测GDF 9来观察各组织的血管化和发育潜能,从而探究磁场生物效应对卵巢组织解冻复苏后基本结构、增殖凋亡特性以及移植后血管化和抗氧化相关生化指标的影响。研究结果表明,冻融处理后的组织遭受到氧化应激,不可避免地导致了卵泡损伤,其中对照组中胶原纤维含量明显减少,颗粒细胞胞浆空泡化严重,移植后微血管生成较少;然而,用SMF处理的样本显示出卵泡结构的完整性增加,组织的增殖功能增强,凋亡现象也明显减少,为磁场辅助复温低温保存卵巢组织的理论提供了依据。通过对组织内能量产生的情况进行分析,SMF处理后组织内ATP生成量增加(P0.05),对磁场的作用机制进一步做出解释。合适强度的静态磁场处理可以有效改善整个卵巢组织的抗氧化能力,从而提升组织内生殖细胞的增殖能力,并且在移植后,可以促进血管再生,维持卵泡发育。研究结果证明了磁场辅助复温在临床卵巢组织冷冻保存中的可行性,为女性生育力的保护提供了新的参考,该方法在辅助生殖领域具有良好的应用前景。