Rock2通过调控IL-33促进肾癌细胞增殖及侵袭转移

作     者：周晓乘 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：洪正东

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：Rock2 IL-33 肾癌 

摘      要：背景与目的Rock2是一种在恶性肿瘤发生和转移中扮演着重要角色的信号蛋白,团队既往研究结果表明,Rock2可通过多种途径促进肾癌的发生发展。白细胞介素33(IL-33)是一种来源于IL-1家族的组织源性核细胞因子,在肾细胞癌组织中表达明显升高,但其对肾细胞癌的作用机制尚不明确。Rock2和IL-33在肾细胞癌组织中均存在高表达,我们推测Rock2对IL-33的分泌可能存在某种调控关系,本研究旨在明确Rock2对IL-33分泌的调控关系以及对肾癌细胞增殖和侵袭转移的影响,为肾癌的治疗提供新的思路。方法通过慢病毒转染构建下调Rock2的肾透明细胞癌786-O细胞,并使用R软件DESeq2包比较Rock2下调组与对照组细胞的基因表达水平差异,筛选出在ROCK2下调组中的上调基因和下调基因。分别收集Rock2下调组以及对照组细胞蛋白以及上清液,检测Rock2下调组细胞IL-33表达水平。进一步验证Rock2对IL-33的调控关系以及IL-33对786-O细胞的作用。设置Rock2下调组和对照组,利用实时荧光定量PCR、RNA测序以及Western blot检测二者IL-33表达水平。在Rock2下调组和对照组中分别加入不同量的IL-33,利用CCK-8检测各组细胞增殖能力。将Rock2下调组和对照组分别设置为未处理组、加入IL-33组、同时加入IL-33和IL-33阻断抗体组,Annexin V染色后,通过流式细胞术测定Rock2下调组细胞和对照组细胞的凋亡情况;再利用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。结果1.Rock2可以促进IL-33的分泌,下调Rock2后IL-33的分泌随之下降。2.CCK-8细胞实验表明,Rock2可通过上调IL-33的分泌促进cc RCC细胞增殖,IL-33促cc RCC细胞的增殖作用可在Rock2下调后回复。3.Annexin V细胞凋亡实验表明,Rock2通过促进IL-33分泌发挥抗cc RCC细胞凋亡作用。下调Rock2可以诱导肿瘤细胞凋亡,同时IL-33的抗肿瘤细胞凋亡作用可在Rock2下调后回复。4.Transwell细胞侵袭实验结果显示,IL-33能显著增加786-O细胞的侵袭能力,IL-33阻断抗体能够抑制IL-33引起的高侵袭能力。下调Rock2后786-O细胞的侵袭能力明显减弱,IL-33也可促进下调Rock2的786-O细胞侵袭,但其促进作用比较于对照组明显变小。结论1.Rock2可促进肾癌细胞增殖、侵袭转移,抑制其凋亡。2.Rock2在肾癌细胞中的上述作用通过促进IL-33分泌实现。3.下调Rock2和阻断IL-33均可发挥抗肿瘤作用。