lncRNA HCG22对胃癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响及机制研究

作     者：张牙 

作者单位：河北大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张卓奇

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：胃癌 lncRNA HCG22 Akt/P70S6K 

摘      要：背景及目的:胃癌(Gastric Cancer,GC)是目前危害人们身体健康的重要疾病之一,每年的发病率和死亡率均位居恶性肿瘤前列,因胃癌发病早期缺乏典型临床表现,往往造成诊断和治疗延误,寻找针对胃癌诊断、治疗的新型特异性标志物是目前防治胃癌的重要方向之一。随着对长链非编码RNA(lncRNA)的不断了解,发现lncRNA在许多肿瘤中表达失调,并通过多种形式展现独特的生物学作用,在癌症进程中既可作为潜在的诊断、评估预后的标志物也可作为治疗的靶点。本研究的目的是探讨lncRNA HCG22在胃癌细胞中的表达情况,并研究对胃癌细胞增殖、迁移、周期、凋亡和自噬的影响及其机制。方法:首先用RT-q PCR检测GES-1、MGC-803、SGC-7901三株细胞lncRNA HCG22的表达。之后对MGC-803细胞感染lncRNA HCG22过表达和对照慢病毒载体,将细胞分为过表达组(LV-HCG22-OE)、对照组(LV-NC)、空白组(Blank)。然后进行细胞功能试验,CCK8和集落形成实验测定MGC-803细胞增殖活性,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,流式细胞术分析对细胞周期分布和凋亡的影响。最后,免疫荧光技术观察caspase-3的荧光信号,蛋白印迹技术(Western blot)检测对凋亡相关蛋白、自噬标志物以及Akt/P70S6K信号通路的影响。结果:(1)与GES-1细胞相比,lncRNA HCG22在MGC-803、SGC-7901细胞中表达均下调,以MGC-803细胞最为显著。(2)成功在MGC-803细胞中过表达lncRNA HCG22,细胞的增殖和迁移能力显著降低,LV-HCG22-OE组细胞G2/M期比例和细胞凋亡率增加。(3)共聚焦显微镜观察到细胞中Caspase-3荧光信号增加,同时Western blot结果显示Bcl-x L、p62表达降低,Bax、LC3-Ⅱ水平升高,Akt/P70S6K信号通路中p-Akt和p-P70S6K的水平显著降低。结论:(1)lncRNA HCG22在胃癌细胞中表达下调,上调lncRNA HCG22后降低MGC-803细胞的增殖和迁移,诱导细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡和自噬。(2)lncRNA HCG22可能通过调控Akt/P70S6K信号通路抑制胃癌MGC-803细胞的进展。