临床慢性子宫内膜炎犬子宫能量代谢与衰老相关因子的检测与分析
作者单位：东北农业大学
学位级别：硕士
导师姓名：肖建华;魏成威
授予年度：2022年
学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学]
摘 要：慢性子宫内膜炎是中老年母犬的临床常见病,通常发病隐秘,患病后会降低母犬的繁殖能力,伴随宫颈闭锁时会引起子宫蓄脓并危及生命。目前国内外对于慢性子宫内膜炎的研究多集中于病例分析、临床治疗与发病机理等方面。对不同程度慢性子宫内膜炎患犬的子宫病变特征、炎症程度、能量代谢水平、细胞衰老程度和纤维化水平进行探究并比较,为诊断、治疗和预后提供进一步的依据和参考。实验材料基本信息统计:本试验于2021年3-8月,在哈尔滨市某动物医院通过B超检确诊后,共收集了20例慢性子宫内膜炎患犬,与6例临床健康犬。患犬年龄范围3≤y11,平均年龄为7.6±2.04y,其中有17例青中年患犬,其余为老年患犬,青中年患犬中有8例闭合型患犬,均为小型犬,其余为开放型患犬。临床健康犬年龄范围5≤y10,均为小型犬。患犬与临床健康犬均处于间情期且无繁殖史。本次收集的患犬中,小型犬的发病率比大型犬的发病率高60%。小型犬中,小型杂种犬的发病率最高,为45%。临床症状和实验室检查结果统计:患犬的患病类型均为慢性子宫内膜炎,其中40%为慢性闭合型子宫内膜炎,其余为慢性开放型子宫内膜炎。可见多饮多尿、腹围增大、阴门分泌物等症状。B超发现子宫内膜增厚、腔内有大面积液性暗区。血常规检测结果提示患犬有不同程度的炎症、贫血情况,生化检测结果提示患犬有不同程度的肝肾损伤。实验分组与方法:在17例青中年患犬中取8例危害较大的闭合型患犬,再随机选择6例,将6例临床健康犬作为对照,共12只母犬进行组织病理学观察,结果分为:(1)健康组:(1)青中年健康组(5≤y8),n=3;(2)老年健康组(8≤y10),n=3。(2)疾病组:(1)轻度炎性浸润组(5≤y8),n=3;(2)重度炎性浸润组(5≤y8),n=3,共4组。然后,用ELISA法检测4组的子宫组织中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8的含量以及线粒体酶ATPase与LDH的含量。最后,利用Western Blot技术检测4组的子宫组织炎症因子(p38/MAPK、NF-κb)、细胞衰老因子(γ-H2AX、p53等)、能量代谢因子(AMPK、PGC1-α等)和纤维化因子(TGF-β1、PI3K等)的表达水平,结果如下:病理学检查结果统计:健康犬的子宫均无炎性浸润,个别表现腺体囊性增生与轻中度纤维化。轻度炎性浸润组患犬的子宫组织表现轻度混合型炎性浸润,子宫内膜轻度增生,少数表现有腺体囊性增生与轻中度纤维化。重度炎性浸润组患犬的子宫表现重度混合型炎性浸润,内膜重度增生或萎缩,宫腔内有积脓,多数表现腺体囊性增生与中重度纤维化。炎症因子ELISA含量统计:重度炎性浸润组的炎症因子含量最高,老年健康组的炎症因子含量稍高于青中年健康组但无差异。线粒体酶ELISA含量统计:重度炎性浸润组的ATPase含量最低,而LDH含量最高。青中年健康组的ATPase含量最高,LDH含量最低。轻度炎性浸润组的ATPase含量高于中/老年健康组,但与老年健康组无差异。炎症、能量代谢、衰老及纤维化相关因子表达量统计:重度炎性浸润组的炎症相关因子(p38/MAPK、NF-κb)、能量代谢因子(GLUT4、Drp1)、细胞衰老因子(γ-H2AX、p53、p16)和纤维化因子(TGF-β1、Smad3、等)表达量最高,衰老因子p-Rb和能量代谢因子(AMPK、PGC1-α、Mfn2)表达量最低。轻度炎性浸润组的炎症因子(p38/MAPK、NF-κb)、能量代谢因子(AMPK、PGC1-α等)、细胞衰老因子(γ-H2AX、p53等)和纤维化因子(TGF-β1、Smad3等)与老年健康组差异较小。青中年健康组的炎症因子(p38/MAPK、NF-κb)、能量代谢因子Drp1、细胞衰老因子(γ-H2AX、p53、p16)和纤维化因子(TGF-β1、Smad3)表达量低于老年健康组但无差异。纤维化因子(PI3K、AKT、p70S6K)表达量高于老年健康组,但无差异。细胞衰老相关因子p-Rb和能量代谢因子(AMPK、PGC1-α、GLUT4、Mfn2)表达量高于老年健康组但无差异。研究结果表明:个别健康犬的子宫在镜下可见囊性增生与轻中度纤维化。患犬的子宫在镜下可见不同程度混合型炎性浸润以及中重度纤维化,多数伴有囊性增生,根据炎性浸润程度可分为轻/重度两类。慢性子宫内膜炎患犬子宫的DNA损伤程度、细胞衰老程度和纤维化程度随炎性浸润程度的增大而加重。在中年轻度炎性浸润患犬的子宫组织中,DNA损伤程度、细胞衰老程度和纤维化程度与年龄较大的临床健康老年犬相当。
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