四川部分地区水生动物源嗜水气单胞菌的分子分型及耐药性调查

作     者：陈梦竹 

作者单位：四川农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：耿毅;周剑

授予年度：2022年

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

主      题：嗜水气单胞菌 分子分型 抗性基因 耐药表型 水生动物 

摘      要：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是广泛分布于水环境中的一种条件致病菌,可感染多种水生动物,主要引起败血症和溃疡综合征。“川鱼作为四川省“10+3重点建设的农业产业体系之一,其年产量达159.899万吨,渔业产值达317.7亿元,在脱贫攻坚与乡村振兴中发挥了重要作用。嗜水气单胞菌是危害四川水产养殖的重要病原菌之一,目前尚不清楚四川地区嗜水气单胞菌的分子分型和耐药性情况。本试验从四川主要水产养殖区的养殖场采集病料,在分离鉴定嗜水气单胞菌的基础上,采用MLST与PFGE方法进行分离菌株的分子分型,K-B法测定耐药表型,Wafergen Smartchip超高通量q PCR检测抗性基因,以明确四川主要水产养殖区嗜水气单胞菌的流行基因型及其亲缘关系、耐药表型和抗性基因,为科学、有效防控该菌的危害提供参考。2019～2021年本研究通过RS(Rimler-Shotts)琼脂培养基筛选、形态学观察及双重PCR检测的方法从四川36个养殖场、11个淡水养殖品种的病料中分离鉴定出64株嗜水气单胞菌。MLST将64株分离菌分为29种ST型,其中25种为新ST型,以MEGA-X的Neighbor-Joining法构建的系统进化树中29个序列型主要分为4大簇。PFGE结果显示,根据相似度在75%以上u PGMA将64株分离菌分为38种基因型。两种分子分型调查都表明四川省主要养殖区的嗜水气单胞菌的基因型具有多样性。MLST主要流行型为ST251型(15/64)和ST27型(12/64),PFGE中流行的基因型为b型(8/64)、i型(7/64)。药物敏感性检测发现,64株嗜水气单胞菌具有明显的多重耐药性。98.3%的菌株对罗红霉素耐药,50%～80%的菌株对亚胺培南、磺胺异恶唑、克林霉素、阿莫西林、复方新诺明耐药,40.6%的菌株对恩诺沙星耐率;95%以上的分离菌株对头孢西丁、头孢拉定敏感,70%以上的分离株对庆大霉素、多西环素和左氧氟沙星等敏感。从64株嗜水气单胞菌株中检出65种抗性基因,各菌株间的抗性基因型具有高度多样性。β-内酰胺类cph A-01、fox5,氨基糖苷类aac(6’)I1、aac C,喹诺酮类mep A,多重耐药类opr D、mex F,可移动元件类int I-1、ISCR1、重金属类cop A等抗性基因较为流行,检出率均超过90%。抗性基因检测的结果与其耐药表型之间有一定相关性。嗜水气单胞菌检出抗性基因所属的耐药机制多样,但菌株可能以失活药物和外排泵为主要的耐药机制。