针刺经筋病灶点结合关节松动术对KOA兔Col-Ⅱ、notch2、Jagged-1影响的实验研究

作     者：郭海清 

作者单位：辽宁中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王树东

授予年度：2022年

学科分类：1005[医学-中医学] 100512[医学-针灸推拿学] 10[医学] 

主      题：膝骨关节炎 关节松动术 经筋病灶点 notch2 Jagged-1 Col-Ⅱ 

摘      要：目的:以经筋理论指导下的针刺经筋病灶点结合关节松动术为治疗手段,从Notch信号通路入手,观察膝骨关节炎兔模型中notch2、Jagged-1蛋白和基因以及Col-Ⅱ蛋白表达的变化、此种联合疗法对膝骨关节炎兔模型中的膝关节软骨中notch2、Jagged-1蛋白和基因以及对Col-Ⅱ蛋白表达的影响,探讨针刺经筋病灶点结合关节松动术改善治疗膝骨关节炎兔的可行性和相关作用机制,为临床提供实验依据及思路。材料与方法:26只大耳白兔,在实验室适应性喂养一周后随机选取6只作为空白组,剩下的20只采用手术法建立兔的左膝膝骨关节炎模型,术中保障无菌环境,切断兔的内侧副韧带和前交叉韧带并确保尽可能避免其他处损伤,术后一周腹腔注射青霉素以防感染,同时每天不固定兔患肢驱赶兔活动30min,三周后随机选取术后的2只兔处死肉眼和镜下观察到患膝关节表面软骨磨损,造模成功。剩余造模后的18只兔随机分为模型组、盐酸氨基葡萄糖组和针刺经筋病灶点结合关节松动术组,每组各6只。空白组和模型组不予任何干预,盐酸氨基葡萄糖组每天盐酸氨基葡萄糖灌胃治疗,针刺经筋病灶点结合关节松动术组每天采用针刺经筋病灶点和施行关节松动术各15min治疗。治疗6周后行为学观察各组兔、测量左侧膝关节屈伸活动范围,随后处死,切取左膝关节及周围软骨组织观察各组兔患膝关节表面磨损程度。镜下采用HE染色观察各组兔的左膝软骨病理形态变化;采用Western Blot检测法和荧光定量PCR检测法检测各组兔软骨细胞中的notch2和Jagged-1的蛋白和mRNA表达含量变化;采用免疫组化法检测各组兔软骨细胞中Col-Ⅱ的蛋白表达变化。得出的实验数据用统计系统SPSS26.0分析,结果使用均数±标准差((?)±s)表示,不同组别间比较使用单因素方差分析(ANOVA),LSD法检测组别间假定等方差,塔姆黑尼T2(M)检验不假定等方差,组间两两比较用独立样本t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果:1.各组兔的左膝关节屈伸活动范围的变化:空白组兔的膝关节屈伸活动范围正常,模型组兔的左膝关节屈伸活动明显受限,两组相比差异有统计学意义(P0.01)。经治疗后,盐酸氨基葡萄糖组和针刺经筋病灶点结合关节松动术组的兔患侧膝关节屈伸活动范围明显增大(P0.01),且针刺经筋病灶点结合关节松动术组的疗效优于盐酸氨基葡萄糖组,结果有统计学差异(P0.05)。2.各组兔的HE染色结果:空白组软骨表面光滑,细胞排列整齐,无细胞簇聚;模型组、盐酸氨基葡萄糖组和针刺经筋病灶点结合关节松动术组出现不同程度的细胞簇聚、表面凹凸不平等现象,其中模型组最为明显。3.各组兔的notch2、Jagged-1、Col-Ⅱ的蛋白检测结果:经WB检测结果显示,兔的软骨细胞中notch2和Jagged-1蛋白在空白组低表达,模型组高表达(P0.01)。治疗后,盐酸氨基葡萄糖组和针刺经筋病灶点结合关节松动术组的notch2和Jagged-1蛋白表达含量均有所降低(P0.01),且针刺经筋病灶点结合关节松动术组上述两指标的表达量降低的更明显,较盐酸氨基葡萄糖组有统计学差异(P0.05)。经免疫组化检测结果显示,兔的软骨细胞中Col-Ⅱ蛋白在空白组高表达,模型组低表达(P0.01)。经治疗后,盐酸氨基葡萄糖组和针刺经筋病灶点结合关节松动术组的Col-Ⅱ蛋白表达含量均有所上调(P0.01),且经筋病灶点结合关节松动术组的Col-Ⅱ蛋白表达量上调幅度更大,与盐酸氨基葡萄糖组比结果有统计学差异(P0.05)。4.各组兔的notch2、Jagged-1的基因检测结果:经荧光定量PCR检测结果显示,兔的软骨细胞中notch2和Jagged-1的mRNA在空白组低表达,模型组高表达(P0.01)。经治疗后,盐酸氨基葡萄糖组和针刺经筋病灶点结合关节松动术组的notch2和Jagged-1的mRNA表达含量均有所降低(P0.01),且针刺经筋病灶点结合关节松动术组上述两指标的表达量降低的更明显,较盐酸氨基葡萄糖组有统计学差异(P0.05)。结论:1.在膝骨关节炎兔模型中,Notch信号通路被激活后,notch2和Jagged-1表达上调,破坏Col-Ⅱ的正常合成与分解、表达减少,关节软骨失去保护,膝骨关节炎发病。2.针刺经筋病灶点结合关节松动术可以有效治疗膝骨关节炎兔模型。此疗法通过降低膝骨关节炎兔模型软骨中的notch2和Jagged-1的表达含量,避免Col-Ⅱ的过度破坏,从而保护关节软骨,达到治疗膝骨关节炎的目的。