细粒棘球蚴感染中脂质代谢对Th17/Treg细胞分化的影响

作     者：常瑗 

作者单位：石河子大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王仙

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：细粒棘球蚴 脂质代谢 肉毒碱棕榈酰基转移酶 

摘      要：目的:1.通过体外体内试验探讨感染细粒棘球蚴的BALB/c小鼠Th17/Treg细胞的分化及其脂质代谢、脂质代谢相关调控因子的变化,研究干扰脂质代谢关键酶对感染细粒棘球蚴的BALB/c小鼠Th17/Treg细胞分化的影响。2.通过体外体内试验探讨BALB/c小鼠感染细粒棘球蚴后调控Th17/Treg细胞分化的分子机制。方法:体内实验:1.采用随机分组法将6周龄健康BALB/c小鼠分为三组,即正常对照组、模型对照+PBS组、模型对照+Etomoxir组,每组各15只小鼠。模型对照+PBS组和模型对照+Etomoxir组小鼠肝被膜下注射5000个细粒棘球蚴原头节,正常对照组小鼠手术处理为在肝被膜下注射0.1 m L PBS。造模一周后,模型对照+Etomoxir组每周两次腹腔注射Etomoxir,剂量为1 mg/kg,模型对照+PBS组腹腔注射等体积PBS。2.在感染后第15天、30天、70天取小鼠脾脏组织,分离淋巴细胞,检测T细胞亚群特异性转录因子的表达、脂质代谢相关酶及调控因子的表达,ELISA检测外周血中细胞因子的表达水平,免疫组织化学法检测脂质代谢通路相关因子的表达。体外实验:1.提取6周BALB/c小鼠脾脏细胞,分离出淋巴细胞,设置对照组和囊液组,培养不同时间点,检测T细胞亚群特异性转录因子、细胞因子、脂质代谢相关酶及调控因子的表达。2.提取6周BALB/c小鼠脾脏细胞,分离出淋巴细胞,设置囊液组和囊液+Etomoxir组,培养不同时间点后检测T细胞亚群特异性转录因子和细胞因子的表达。结果:1.囊液刺激及感染细粒棘球蚴后,与正常对照组相比,实验组小鼠Treg细胞特异性转录因子叉头样转录因子P3(Foxp3)的表达升高(P0.01),与Treg细胞功能相关的细胞因子白细胞介素10(IL-10)表达增加(P0.01);Th17细胞特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体γt(RORγt)的表达降低(P0.05),与Th17细胞功能相关的细胞因子白细胞介素17A(IL-17A)的表达同样降低(P0.01)。2.囊液刺激及感染细粒棘球蚴后,调控脂肪酸合成的转录因子胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)表达降低(P0.01),而调控脂肪酸氧化的因子过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)表达升高(P0.05);调控脂肪酸β氧化的关键酶肉毒碱脂酰转移酶1A(CPT1a)表达增加(P0.01),而调控脂肪酸合成的限速酶乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)的表达下降(P0.05);与正常对照组相比,实验组肝激酶B1(LKB1)和AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)的表达均升高(P0.01),p AMPK和p LKB1的蛋白含量也出现增多(P0.05)。3.通过抑制剂干预脂肪酸氧化后,发现抑制剂组小鼠Foxp3的表达下降(P0.01),IL-10的表达也出现下降(P0.05);而RORγt的表达上调(P0.05),IL-17A表达亦升高(P0.05)。结论:1.感染细粒棘球蚴后,T细胞分化向Treg细胞偏移,导致机体免疫抑制功能加强,对虫体杀伤作用减弱。2.感染细粒棘球蚴后,T细胞发生代谢重编程,脂肪酸β氧化增强,脂质合成减弱。3.加入脂肪酸β氧化抑制剂后可逆转细粒棘球蚴感染引起的T细胞分化偏移,表明脂质代谢的改变可以影响T细胞的分化。4.感染细粒棘球蚴后,LKB1-AMPK信号通路被激活。