巴豆叶通过介导ERK通路对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠海马CA3/DG区神经元的影响及机制研究

作     者：潘佐泱 

作者单位：宁夏医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：贾孟辉

授予年度：2022年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：巴豆叶 脑缺血再灌注模型 海马CA3/DG区 ERK1/2 ERK5 

摘      要：目的:通过研究巴豆叶对脑缺血再灌注模型大鼠海马CA3/DG区ERK1/2、ERK5通路的影响,探讨巴豆叶对CIRI的潜在作用及机制。方法:将216只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组、巴豆叶低、中、高剂量组,各组按取材时间点不同又分为1d组、3d组和7d亚组。采用Longa线栓法制备大鼠MACO模型,干预组灌胃药物剂量:0.0108、0.6、1.2、1.8g/kg,假手术组和模型组灌胃等体积9%Nacl,2次/d,以Garcia JH评分法进行神经功能评测,HE观察神经元形态;TUNEL法检测大鼠海马CA3/DG区细胞凋亡;Western Blot检测蛋白表达;免疫组织化学法检测大鼠脑组织ERK蛋白的相对表达量及位置。结果:1.神经功能评分结果(1)模型组和各干预组评分较假手术组均降低(P0.01);(2)各干预组评分较模型组均升高,随着干预剂量的增加,评分也逐渐升高,尼莫地平组评分高于低、中剂量组,低于高剂量组(P0.01);(3)除假手术组外,各组评分均随着干预时间的延长逐渐升高(P0.01)。2.大鼠脑组织HE染色结果(1)模型大鼠神经细胞均出现不同程度损伤;(2)各药物干预组均能不同程度改善损伤,随着干预剂量的增加,修复程度也逐渐明显,尼莫地平组效果优于巴豆叶低、中剂量组;(3)各干预组细胞形态均随着干预时间的延长明显改善。***检测结果(1)在1d、3d、7d三个时间点处理下,模型组及各干预组大鼠海马CA3/D区凋亡计数较假手术组均增加(P0.01);(2)各干预组较模型组,凋亡计数均降低(P0.01),随着巴豆叶剂量的升高计数逐渐降低(P0.01),尼莫地平组低于低、中剂量组,高于高剂量组(P0.01);(3)除假手术组外,其余各组大鼠海马CA3/DG区凋亡计数随着时间变化均降低(P0.01)。***-bolt结果(1)在三个时间点处理下,模型组及各干预组海马组织ERK1/2、p-ERK1/2、ERK5、p-ERK5蛋白表达较假手术组均升高(P0.01);(2)各干预组较模型组,海马组织相关蛋白表达均升高(P0.01),随着巴豆叶剂量的升高蛋白表达逐渐升高(P0.01),尼莫地平组蛋白表达高于低、中剂量组,低于高剂量组(P0.01);(3)除假手术组外,各组海马组织ERK1/2、p-ERK1/2、ERK5、p-ERK5蛋白表达均在1d-3d呈上升趋势,3d-7d逐渐下降,并接近假手术组(P0.01)。5.免疫组化结果(1)在不同时间点处理下,模型组及各干预组ERK1/2、ERK5蛋白阳性计数较假手术组均升高(P0.01);(2)各干预组较模型组,ERK1/2、ERK5蛋白阳性计数均升高,随着巴豆叶剂量的升高蛋白表达均逐渐升高,尼莫地平组相关阳性计数均高于巴豆叶低、中剂量组,低于巴豆叶高剂量组(P0.01);(3)除假手术组外,各组ERK1/2、ERK5蛋白阳性计数均随着时间变化在1d-3d呈上升趋势,3d-7d均呈下降趋势(P0.01),ERK1/2、ERK5蛋白主要在胞膜及胞核膜上表达,并于第3d主要出现在细胞核中,而在胞浆中逐渐减少。结论:(1)巴豆叶可能上调ERK1/2、ERK5通路蛋白的表达,有效改善大鼠CIRI后神经功能缺损、抗海马CA3/DG区细胞凋亡,且效果与作用剂量及时间均成正比;(2)这可能与巴豆叶介导大鼠脑缺血再灌注损伤后ERK1/2、ERK5通路的进一步激活,从而发挥抗海马神经元凋亡的神经保护机制有关;(3)ERK1/2、ERK5通路磷酸化可能促进大鼠CIRI后海马CA3/DG区神经元的存活,从而对CIRI具有神经保护作用。