牛布鲁氏菌病实用诊断技术流程的建立与应用

作     者：李莉玲 

作者单位：新疆农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姚刚;钟旗;谷文喜

授予年度：2022年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：牛 布鲁氏菌病 诊断 技术流程 

摘      要：随着经济的发展,家畜的流通极其频繁,这使得家畜间布鲁氏菌病(简称布病)的传播更加迅速。目前布病诊断、免疫、预防等各方面也有较快的发展,但针对布病的排菌期实用诊断技术仍然缺乏,这为有效防控布病、净化牛群造成极大困难,因此建立有效的牛布病排菌期实用诊断技术流程尤为重要。本研究用虎红平板凝集试验(RBT)、微量试管凝集试验(MAT)、荧光偏振试验(FPA)和半抗原琼脂扩散试验(NH-GD)进行布病抗体检测。以MAT结果作为判定标准,比较FPA与MAT的符合率、敏感性和特异性;用NH-GD检测方法进行布病的排菌期实用诊断,阳性样本做AMOS-PCR定型检测。通过对检测结果的分析,选择不同检测方法建立牛布鲁氏菌病实用诊断技术流程,并运用于牛场布病的监测和净化中。具体结果如下:1.牛布病免疫学诊断方法的研究。分别用RBT、MAT、FPA和NH-GD四种布病抗体检测方法检测106份血清样品,结果其中RBT阳性率30.19%(32/106),MAT阳性率24.53%(26/106),FPA阳性率18.86%(20/106),NH-GD阳性率12.26%(13/106)。NH-GD诊断结果为13份阳性,经AMOS-PCR检测一份为牛Ⅰ型,一份为牛Ⅲ型。2.牛布病排菌期实用诊断技术流程的建立。通过对布病不同检测方法的选择和组合,建立了两种牛布病排菌期实用诊断技术流程,流程一:RBT初筛,MAT确诊,NH-GD区别诊断,AMOS-PCR定型;流程二:RBT初筛,FPA复核,NH-GD区别诊断,AMOS-PCR定型。NH-GD阳性牛扑杀并无害化处理。3.牛布病排菌期实用诊断技术流程的应用。流程一的应用,对A牛场采集的3 688份血清样品进行检测,感染阳性率为0.57%(21/3 688),阳性样品经AMOS-PCR检测及测序为牛Ⅰ型,A19疫苗株。流程二的应用,对B牛场采集的2 600份牛血清样品进行检测,感染阳性率为0.46%(12/2 600),阳性样品经AMOS-PCR检测及测序为牛Ⅰ型,A19疫苗株。检出的感染阳性牛做扑杀并无害化处理。本研究建立的两种排菌期实用诊断技术流程均可区分疫苗免疫与自然感染牛,可用于牛场进行布病监测;PCR检测及测序表明为A19疫苗株感染,原因是大剂量、重复、不规范免疫导致的;建议牛场立即扑杀并无害化处理NH-GD阳性牛;通过扑杀感染牛牛场达到控制和净化布病的目的。