RBM38c新剪接亚型蛋白在自噬中的初步研究

作     者：曹禹 

作者单位：华中农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张敏

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：RNA结合蛋白 RBM38c TFEB LC3 自噬 纳米抗体 

摘      要：自噬是一种维持细胞稳态的多功能降解机制,通过将细胞质物质隔离在双层膜自噬小体中,并通过自噬小体与溶酶体融合,从而分解衰老或受损的细胞器或异常蛋白。在肿瘤微环境中,缺氧、营养缺乏、氧化应激以及免疫信号,可以促进肿瘤细胞发生自噬。RNA结合蛋白在介导基因的转录后调控中发挥作用,参与维持基因表达的稳态。RNA结合蛋白也可能参与自噬过程调控,通过更广泛的机制影响细胞稳态,其中机制值得研究。RNA结合蛋白RBM38参与调控p53家族基因等多种癌基因的转录后表达而影响癌症发生。RBM38c是一种新的RBM38剪接亚型,其功能和作用机制未知。我们通过GST-pull down实验发现RBM38c和自噬关键蛋白LC3直接互作。通过免疫荧光发现RBM38c参与细胞自噬过程,并与LC3在此过程中有明显的共定位。RBM38c存在关键的LC3互作区,介导其参与细胞自噬。我们发现DNA损伤药物激活RBM38c表达。应用CRISPR敲除转录因子TFEB,证明TFEB介导DNA损伤激活RBM38c表达。双荧光素酶实验证明TFEB直接调控RBM38c启动子活性。此外,我们筛选了针对RBM38c的特异性纳米抗体,通过构建bio PROTAC系统,对RBM38c进行了蛋白水平的敲低,为进一步研究RBM38c的作用机制提供了新的手段。综上,我们围绕新亚型RBM38c的功能及其作用机制开展了初步研究,DNA损伤通过转录因子TFEB直接介导RBM38c的激活,其通过细胞自噬可能在细胞稳态维持中发挥重要作用。