湖北省三个生猪屠宰场小肠结肠炎耶尔森菌污染情况调查及分离株特性研究

作     者：徐艳丽 

作者单位：华中农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘梅;裴洁

授予年度：2022年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：小肠结肠炎耶尔森菌 生猪屠宰场 污染情况 生物学特性 ERIC-PCR分型 

摘      要：小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica,Ye）是重要的食源性致病菌,可引起耶尔森菌病（Yersiniosis）。猪是Ye的主要宿主,人常通过食用被Ye污染的猪肉引发耶尔森菌病,该病对老人、幼儿和免疫功能低下的人群有高达50%的病死率。目前国内鲜有湖北省地区Ye污染情况及Ye分离株生物学特性的报道。本研究于2021年到湖北省3个生猪屠宰场采集样品,进行了Ye的分离与鉴定,对分离株进行了生物型、毒力基因携带情况、抗生素耐药性、生物被膜形成能力和消毒剂抗性等生物学特性的测定和分析,基于肠杆菌基因间重复序列（enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC）对分离株进行了分子分型,以此掌握了3个生猪屠宰场Ye的污染情况、分离株的生物学特性和遗传多样性,从而为生猪屠宰场防控Ye的污染和制定安全策略提供数据支撑。结果如下:***在生猪屠宰场的污染情况本研究于2021年5月和7月从湖北省A、B和C这3个生猪屠宰场共采集样品1950份,包括450份待宰生猪鼻腔拭子、450份待宰生猪直肠拭子、450份体表拭子、480份肉样和120份环境样。共分离出9株Ye,总分离率为0.46%。3个屠宰场中C场分离率最高,分离率为1.19%。5月份与7月份分离率无显著差异。不同屠宰环节样品中肉样分离率最高,分离率为1.67%。2.分离株的生物学特性2.1.生物型七叶苷水解试验结果显示,分离株均为生物1A型菌株。2.2.毒力基因PCR检测结果显示,检出率最高的毒力基因是ymo A（100%）,其次是yst B（88.89%）、inv A（66.67%）和myf A（44.44%）;分离株均不携带毒力基因ail和yst A。2.3.抗生素耐药性抗生素敏感性试验结果显示,所有分离株均对氨苄西林具有耐药性;1株对四环素具有耐药性;所有分离株均对庆大霉素、环丙沙星、氨曲南、多粘菌素B、头孢噻肟、美罗培南、头孢吡肟和氟苯尼考敏感。2.4.生物被膜形成能力结晶紫染色试验结果显示,25℃培养条件下,分离株均能形成生物被膜;培养到24 h时,有2株呈现出中、强生物被膜形成能力;培养到48 h时,有5株呈现出中、强生物被膜形成能力。2.5.消毒剂抗性本研究用“畜禽屠宰企业消毒技术规范规定使用的最低有效浓度过氧乙酸和苯扎溴铵进行悬液定量杀菌试验,结果显示,60 mg/L过氧乙酸作用分离株5min时,杀菌率为100%;200 mg/L苯扎溴铵作用2 min时,杀菌率为100%,表明分离株对过氧乙酸和苯扎溴铵敏感。200 mg/L是规范规定使用的有效氯浓度,本研究用该有效氯浓度的次氯酸钠作用分离株2 min时,杀菌率为92.67%,表明分离株对次氯酸钠有抗性。3.分离株的ERIC-PCR分型PCR测定分离株ERIC（肠杆菌基因间重复序列）发现,9个分离株可分为2个大簇、3种型别,相似系数范围为0.15～1.00,反映出分离株之间具有较高的遗传多样性。