蛴螬、白头翁活性部位分离及配伍抗病毒作用机制研究

作     者：颜娓娓 

作者单位：山东中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周长征

授予年度：2019年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：蛴螬 白头翁 配伍 呼吸道合胞病毒 抗病毒作用机制 

摘      要：目的:在细胞水平下,通过体外抗病毒示踪技术、以抗病毒试验结果为导向,筛选蛴螬体外抗病毒谱;经初步纯化后与白头翁活性部位配伍并筛选出最佳配比;探究蛴螬-白头翁最佳配比的体外抗病毒作用机制;通过感染小鼠模型探究蛴螬活性部位和蛴螬-白头翁最佳配比的体内药理活性与免疫调节作用机制。方法:1.通过体外抗病毒示踪技术筛选蛴螬体外抗病毒谱和最佳提取方式。2.将水提物通过醇沉、超滤、大孔树脂吸附等方法初步纯化后与白头翁活性部位配伍并通过基线等比增减设计法筛选出最佳配比。3.通过体外抗病毒试验法探究蛴螬活性部位体外抗呼吸道合胞病毒（RSV）作用机制和蛴螬-白头翁最佳配比体外抗病毒作用机制。4.建立小鼠RSV感染模型,探究蛴螬活性部位和蛴螬-白头翁最佳配比的体内药理作用。5.建立小鼠RSV感染模型,结合ELISA试剂盒法检测小鼠血清中白细胞介素2（IL-2）、细胞干扰素γ（INF-γ）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量,初步探究蛴螬活性部位和蛴螬-白头翁最佳配比对小鼠的免疫调节作用。结果:1.蛴螬水提物体外抑制肠道病毒71型（EV-71）效果最好,其次为RSV,选择RSV为研究对象,与具有良好抗RSV作用的白头翁配伍做进一步研究。2.最佳醇沉条件为:乙醇体积分数为50%;筛选树脂结果表明,经D101型大孔吸附树脂吸附后,水1洗脱部位抗RSV效果最好;蛴螬-白头翁最佳配比为蛴螬:白头翁=4:6。3.蛴螬活性部位、蛴螬-白头翁最佳配比可能是在病毒入侵机体细胞之后发挥抗病毒作用。4.通过各组间肺组剂量组、蛴螬-白头翁最佳配比小剂量组均能明显提高小鼠血清中IFN-γ、IL-2的含量,降低TNF-α的含量,从而发挥体内抗病毒作用,蛴螬-白头翁最佳配比小剂量组体内抗织损伤评分、病理切片结果看出蛴螬活性部位、蛴螬-白头翁最佳配比均能减轻小鼠肺病变,蛴螬大剂量组、配伍小剂量组效果较好,配伍小剂量组效果优于蛴螬大剂量组。5.蛴螬有效部位大剂量组、蛴螬-白头翁最佳配比小剂量组均能明显提高小鼠血清中IFN-γ、IL-2的含量,降低TNF-α的含量,从而发挥体内抗病毒作用,蛴螬-白头翁最佳配比小剂量组体内抗病毒效果优于蛴螬有效部位小剂量组。结论:蛴螬水提物经醇沉、超滤、大孔树脂吸附等初步的纯化后具有良好的体外抗RSV作用,与白头翁配伍后效果显著提高;通过体外抗病毒作用机制探究发现,蛴螬活性部位、蛴螬-白头翁最佳配比（蛴螬:白头翁=4:6）均可能是在RSV入侵机体细胞后发挥抗病毒作用;体内试验结果表明,蛴螬活性部位、蛴螬-白头翁最佳配比有较好的体内抗RSV药理作用,且配伍组效果优于蛴螬活性部位组;ELISA试剂盒试验表明,蛴螬活性部位、蛴螬-白头翁最佳配比组均能通过提高IFN-γ、IL-2的含量,降低TNF-α的含量发挥抗病毒效果,且蛴螬-白头翁配伍组效果明显优于蛴螬活性部位组,说明蛴螬、白头翁配伍后产生了“增效作用。