几种金银花多糖的免疫调节活性及其构效关系研究

作     者：马鹏程 

作者单位：遵义医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张涛;孙成新

授予年度：2022年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：金银花 多糖 分离纯化 免疫调节 

摘      要：目的:对两个产地金银花总糖(Lonicera japonica Thunb polysaccharide,LJP)进行分离纯化、基本结构解析以及免疫调节活性研究,明确两个产地金银花多糖在基本结构和免疫调节活性方面的异同,初步探讨金银花多糖免疫调节活性的构效关系。方法:首先,经热水煮提-乙醇醇沉的方法得到山东平邑金银花总糖(PYLJP)及河南封丘金银花总糖(FQLJP)。其次,采用DEAE-纤维素柱分别对两个产地LJP分离纯化得到山东平邑中性糖(PYLJP-N)、山东平邑酸性糖(PYLJP-A)、河南封丘中性糖(FQLJP-N)及河南封丘酸性糖(FQLJP-A);并进一步采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱用不同浓度Na Cl溶液对FQLJP-A及PYLJP-A分离纯化,均各得到4个组分,即FQLJP-A-1QLJP-A-4和PYLJP-A-1YLJP-A-4。采用HPGPC、HPLC、FT-IR等方法对PYLJP和FQLJP及其子组分进行平均分子量、单糖组成等基本结构分析。最后,采用环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)诱导的免疫抑制小鼠模型,分析FQLJP-A、PYLJP-A、FQLJP-N及PYLJP-N四种金银花多糖组分对免疫抑制小鼠的胸腺指数、脾淋巴细胞增殖、血清细胞因子和免疫球蛋白含量、腹腔巨噬细胞吞噬活性的影响,并对比分析四种多糖免疫调节作用的异同。结果:本文采用热水煮提-乙醇醇沉法得到PYLJP和FQLJP(产率分别约为5.95%和5.34%)。PYLJP和FQLJP经DEAE-纤维素分离纯化后,分别得到PYLJP-N、PYLJP-A、FQLJP-N和FQLJP-A(产率分别约为31.28%、53.71%、29.05%、40.28%)。FQLJP-A及PYLJP-A进一步纯化后,分别得到FQLJP-A-1、FQLJP-A-2、FQLJP-A-3、FQLJP-A-4及PYLJP-A-1、PYLJP-A-2、PYLJP-A-3、PYLJP-A-4(产率分别约为19.0%、46.2%、6.3%、2.7%及37.0%、14.0%、5.0%、4.8%)。单糖组成结果表明,PQLJP-N和FQLJP-N的单糖构成相似,但单糖构成的摩尔比例有所差别;PYLJP-A和FQLJP-A及其子组分之间的单糖构成及摩尔比存在较大差异。PYLJP-A-1、PYLJP-A-4主要由Gal、Glc、Gal A组成,其摩尔比分别为4.93:1.06:0.95与4.35:2.13:1.52;PYLJP-A-2、PYLJP-A-3主要由Gal、Glc、Man组成,其摩尔比分别为4.58:3.61:0.41与4.08:4.26:0.42;FQLJP-A-1QLJP-A-4均主要由Gal、Glc、Gal A组成,其摩尔比分别为4.29:1.19:0.84、2.89:2.81:1.22、1.87:2.31:4.75、0.76:0.54:8.18,其中FQLJP-A-1和FQLJP-A-2还含有少量Man及Rha。分子量分析结果表明,PQLJP-N和FQLJP-N平均分子量近似,而PYLJP-A和FQLJP-A及子组分之间差别较大。红外光谱结果表明,PQLJP-N和FQLJP-N结构相似,而PYLJPA和FQLJP-A在羧基的甲酯化度方面存在明显的差异。最后,免疫调节实验表明,FQLJP-A、PYLJP-A、FQLJP-N及PYLJP-N均可以缓解CTX诱导的小鼠免疫抑制,其中FQLJP-A和PYLJP-A免疫调节活性较强于FQLJP-N及PYLJP-N。结论:两个产地金银花总糖均被分离纯化成1个中性糖组分和5个酸性糖组分,这些多糖组分的基本结构存在较为明显的差异,尤其是酸性糖之间。上述的多糖组分均展现出一定的免疫调节活性,其中,酸性糖展现出相对较高的免疫调节活性,这可能与它们的基本结构(分子量、单糖组成等)有一定关系。本研究为进一步研发新型免疫调节剂或辅剂提供了一定的实验依据。