芹菜素协同达卡巴嗪抑制恶性黑色素瘤的作用效果与机制研究

作     者：杨国恒 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘晗

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：PD-1 芹菜素 达卡巴嗪 联合治疗 Jurkat T 免疫检查点 

摘      要：背景与目的:黑色素瘤作为严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤,引发了人们对其不断地研究,期待能够找到治愈甚至仅仅是控制缓解的方案。目前以达卡巴嗪为代表的可用于临床治疗黑色素瘤的化疗药物十分有限,并且单一用药的临床效益十分短暂,极易出现耐药。因此,迫切需要找到可以联合使用的治疗黑色素瘤的有效药物。随着对黑色素瘤的深入研究发现,黑色素瘤细胞在逃避T细胞的追捕过程中,会在自身表面形成一些抑制作用的信号从而利用免疫检查点控制T细胞的功能。其中PD-1/PD-L1是黑色素瘤细胞作用的一个关键性的免疫检查点。黑色素瘤细胞表面表达的PD-L1分子与T细胞表面的PD-1结合,从而控制了T细胞活力,并引发肿瘤细胞免疫逃逸。因此我们期待可以发现抑制免疫检查点PD-1/PD-L1的新的药物,或许能够为黑色素瘤在临床方面的治疗提供重要的参考。方法与结果:在此,通过蛋白免疫印迹实验,我们筛选并鉴定了一个新的能够向下调控免疫检查点分子PD-1的黄酮类化合物芹菜素。它能够以时间依赖和浓度依赖的方式通过蛋白酶体途径对PD-1蛋白进行降解。通过实验分析,我们发现芹菜素能够有效的抑制黑色素瘤细胞的增殖,并能够有效促进黑色素瘤细胞的凋亡。我们还发现芹菜素联合达卡巴嗪治疗,成功将黑色素瘤细胞周期阻止在了G2/M期。免疫杀伤实验显示,芹菜素有效增加了Jurkat T细胞对黑色素瘤细胞杀伤的敏感性。小鼠成瘤实验中,芹菜素联合达卡巴嗪治疗,比单一给药更有效抑制了B16F10细胞的成瘤能力,并且联合用药显著增加了CD8+T细胞和CD4+T细胞在肿瘤组织中的浸润。结论:1.芹菜素能够抑制黑色素瘤的发生发展,并与达卡巴嗪联合使用表现出积极的协同效果。2.芹菜素在蛋白水平向下调控免疫检测点蛋白PD-1。3.芹菜素能够增强Jurkat T细胞对黑色素瘤细胞的免疫杀伤敏感性,抑制了黑色素瘤细胞的免疫逃逸。4.芹菜素增加了CD8+T细胞和CD4+T细胞对黑色素瘤组织的免疫浸润,协同达卡巴嗪抑制黑色素瘤的成瘤能力。