白藜芦醇对蝮蛇毒致大鼠后肢软组织损伤治疗作用的实验研究

作     者：卜婷婷 

作者单位：遵义医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：汪松

授予年度：2022年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：蝮蛇毒 抗蝮蛇毒血清 白藜芦醇 SIRT1信号通路 

摘      要：目的:研究白藜芦醇（RES）对蝮蛇毒致大鼠后肢软组织损伤的治疗效果,并初步探讨其机制。方法:分组:将60只健康SD大鼠,随机分为4组:对照组、蛇毒组、RES组、抑制剂组,每组15只。建模:对照组胫前肌注射等量生理盐水;蛇毒组经大鼠后肢胫前肌中段注射短尾蝮蛇毒液（10mg/kg）;血清组经大鼠后肢胫前肌中段注射短尾蝮蛇毒液后立即尾静脉注射抗蝮蛇毒血清,连续注射3天（350U/kg）;RES组于注射蛇毒后10min内尾静脉注射抗蝮蛇毒血清并灌胃给RES（200mg/kg）,抗蛇毒血清连续用药3天,RES灌胃给药7天;抑制剂组尾静脉注射EX527（5mg/kg）30min后注射蛇毒,然后立即予尾静脉注射抗蝮蛇毒血清及灌胃给RES,每次给RES前30min尾静脉注射EX527。每组大鼠每日测量双侧腿围及局部创口面积;分别于1、3、7天取心尖血行肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酐（Cr）等指标检测,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）监测血清白细胞介素-6（IL-6）水平;并于取血之后处死大鼠取胫前肌组织,观察肌肉病理变化,采用蛋白质免疫印迹（WB）检测沉默调节蛋白1（SIRT1）表达水平。结果:⑴在干预1天、3天和7天后,与对照组相比,蛇毒组、RES组、抑制剂组均出现大鼠后肢水肿并形成坏死创面,差异有统计学意义（P0.05）;蛇毒组和抑制剂组相比差异无统计学意义（P0.05）;与蛇毒组和抑制剂组相比,RES组形成的坏死创面明显较小（P0.05）,腿围也明显降低（P0.05）。⑵与对照组相比各组CK、LDH和AST活性均明显增高（P0.05）,且前3天随时间延长各组值逐渐增高,第7天表达水平低于第3天。与蛇毒组和抑制剂组相比,RES组CK、LDH和AST表达水平明显降低（P0.05）。⑶与对照组相比各组血清中IL-6水平均明显增高（P0.05）。第7天,RES组较蛇毒组和抑制剂组IL-6表达水平明显降低（P0.05）。⑷与对照组相比,各组均可见横纹肌结构破坏,肌细胞排列紊乱、炎性细胞浸润。与蛇毒组和抑制剂组相比,RES干预使横纹肌结构损伤、肌细胞排列紊乱、炎性细胞浸润的程度明显减轻。⑸SIRT1表达分析:予RES干预治疗后SIRT1表达明显上调（P0.05）,予EX527后其表达被抑制。结论:RES可明显减轻蝮蛇毒导致的大鼠后肢软组织水肿、坏死,其机制可能与RES激活SIRT1信号通路有关。