CRYAB在宫颈癌中的表达及作用机制研究

作     者：黄宏宝 

作者单位：右江民族医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：陈发钦

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：αB-晶状体蛋白(CRYAB) 宫颈癌 过表达 RNA测序 信号通路 

摘      要：目的:宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,对女性的身心健康构成严重的威胁。中国2020年的新发病例为109741例,死亡病例为59060例。目前早期宫颈癌致死的患者已不多见,但中晚期或者复发患者死亡率仍然居高不下。宫颈癌的病因仍不完全明确,除了人类乳头状瘤病毒致病性被公认以外,宫颈癌的分子机制仍然处在广泛探索的阶段。目前能明确应用于临床作为宫颈癌诊断、治疗和评估预后的靶点不多,寻找更有效的分子靶点对宫颈癌的研究意义重大。αB-晶状体蛋白（αB-crystallin,CRYAB）是一种蛋白质编码基因,无论是在避免细胞不受外界应激,还是在预防蛋白质聚集方面,这种具备分子伴侣功能的小分子热休克蛋白都能起到重要的保护作用。CRYAB可以抑制细胞凋亡,参与细胞周期和细胞增殖的调控,这些都与肿瘤发生发展紧密相关。目前已知CRYAB在肺癌、胃癌、鼻咽癌、和膀胱癌等肿瘤中差异表达并参与肿瘤的调控。转录组测序结果分析显示,CRYAB在宫颈癌中低表达,是蛋白相互作用网络中的核心蛋白。本课题拟研究CRYAB在宫颈癌中的表达情况及作用机制,为宫颈癌预防控制提供科学理论支持。方法:（1）应用网络数据库分析CRYAB在宫颈癌及泛癌组织中的表达情况,研究CRYAB的差异表达与肿瘤生存期的关系。分别通过RT-PCR和Western blot检测CRYAB在人正常宫颈上皮细胞、Hela及Si Ha细胞系中m RNA和蛋白的表达情况。（2）构建过表达CRYAB慢病毒载体,包装并感染宫颈癌Hela和Si Ha细胞系,获得稳定转染的过表达细胞株,随后进行细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移及侵袭能力和细胞活力检测。（3）对过表达CRYAB的宫颈癌细胞系进行RNA测序,通过生物信息学分析,筛选与CRYAB表型相关的重要分子和信号通路。结果:（1）CRYAB在宫颈癌组织和Hela、Si Ha细胞系中低表达。CRYAB在25种肿瘤中存在差异表达,其中,低表达17种,高表达8种。在卵巢癌、肺癌和胃癌中低表达的CRYAB预示患者有更高的总体生存期。（2）过表达CRYAB后,Si Ha细胞的活力明显下降,Hela细胞的活力变化不明显;Si Ha细胞凋亡明显增加,Hela细胞的凋亡变化不明显;Hela和Si Ha中G1期细胞增多,S期细胞均明显减少;Si Ha细胞侵袭能力明显下降,Hela细胞的侵袭能力变化不明显;Hela和Si Ha迁移能力均明显下降。（3）转录组测序结果显示,过表达CRYAB后存在3695个差异基因,其中,1858个基因高表达,1837个基因低表达。基因本体论（Gene Ontology,GO）注释显示,差异基因被富集最多的前5个生物学过程分别是骨髓白细胞介导免疫（myeloid leukocyte mediated immunity）、白细胞脱颗粒（leukocyte degranulation）、免疫反应中的髓系细胞激活（myeloid cell activation involved in immune response）、中性粒细胞介导免疫（neutrophil mediated immunity）和粒细胞激活（granulocyte activation）。KEGG pathway分析显示,差异基因主要富集在长寿调节通路（Longevity regulating pathway）;Fox O信号通路（Fox O signaling pathway）;内噬作用（Endocytosis）;细胞周期（Cell cycle）;细胞衰老（Cellular senescence）等通路中。结论:（1）CRYAB在宫颈癌中低表达,可能是宫颈癌的抑癌基因。（2）CRYAB具有抑制细胞活性、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,有作为宫颈癌诊断和治疗靶点的潜力。（3）CRYAB可能通过长寿调节通路参与宫颈癌的调控。