临床拟诊结核性葡萄膜炎患者眼内液结核分枝杆菌多重PCR检测及细胞因子定量分析

作     者：许惠容 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈放

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：结核性葡萄膜炎 多重聚合酶链式反应 眼内液 结核分枝杆菌 结核性视网膜血管炎 流式细胞技术 细胞因子 

摘      要：第一部分多重PCR技术检测临床拟诊结核性葡萄膜炎患者眼内液结核分枝杆菌DNA目的采用多重PCR(Polymerase chain reaction,聚合酶链式反应)技术检测临床拟诊为结核性葡萄膜炎的患者眼内液结核分枝杆菌DNA,探讨眼内液多重PCR检测在结核性葡萄膜炎诊断中的作用。方法设计结核分枝杆菌中三个特异性靶基因(MPB64、CYP141、IS6110)的引物,通过结核标准菌株H37Rv的DNA与已确诊结核感染患者体液的DNA进行多重PCR检测,验证靶基因引物的特异性与检测方法的可行性。选取2019年12月至2020年12月于我院临床拟诊的结核性葡萄膜炎患者15例(18眼)。收集患者初诊时的眼内液15例(房水12例,玻璃体液3例),对于葡萄膜炎累及双眼的患者,取炎症较重眼的眼内液。采用多重PCR技术检测15例拟诊结核性葡萄膜炎患者眼内液中结核分枝杆菌DNA。经眼科与感染科医生共同评估后,15例拟诊结核性葡萄膜炎患者接受诊断性抗结核治疗一月。诊断性抗结核治疗若无效则停药,有效(眼部炎症减轻或消退)则继续抗结核治疗至少六个月,抗结核治疗结束后眼内炎症消退且随访期内无复发为临床抗结核治疗有效。分析抗结核治疗有效的临床拟诊结核性葡萄膜炎患者的眼内液多重PCR检测结果及患者临床特征。结果1.经结核标准菌株H37Rv的DNA与6例已确诊结核感染患者体液DNA多重PCR的反复检测,证实了所设计靶基因引物的特异性及检测方法的可行性。2.多重PCR检测15例临床拟诊结核性葡萄膜炎患者眼内液的结核分枝杆菌DNA,三个靶基因MPB64、CYP141、IS6110的DNA泳道均未见DNA扩增条带。3.15例患者接受抗结核治疗,4例因治疗效果不满意或依从性不佳中止抗结核治疗或失访,其余11例患者完成抗结核治疗。治疗后11例(13眼)视力提高或稳定,随访期间眼部炎症未复发。11例抗结核治疗有效的临床拟诊结核性葡萄膜炎患者中,男性6例(54.5%),女性5例(45.5%),年龄47-74岁,平均63.6±7.9岁,既往结核性胸膜炎病史患者1例。11例(100%)患者T-SPOT(T cell spot test,结核感染T细胞斑点试验)检测结果阳性,5例(45.5%)患者PPD(purified protein derivative,结核菌素纯蛋白衍生物试验)检测结果阳性。4例(36.4%)患者胸部CT有异常表现,其中1例为活动性肺结核病灶,3例为陈旧性结核纤维钙化灶。2例患者(18.2%)累及双眼,9例患者(81.8%)累及单眼。6眼(46.2%)表现为视网膜血管炎,5眼(38.5%)表现为全葡萄膜炎,2眼(15.4%)表现为中间葡萄膜炎。11例患者抗结核治疗的时间为6-10个月(平均7.1个月),其中4例(36.36%)联合口服激素治疗。初诊时平均Log MAR视力为1.04±0.89,治疗后末次随访平均Log MAR视力为0.75±0.81,治疗后视力较前明显提高,且差异具有统计学意义(P=0.018)。结论11例临床拟诊结核性葡萄膜炎患者最终经规范抗结核治疗有效,但眼内液多重PCR检测均未能检出结核分枝杆菌DNA。眼内液PCR检测结果需临床医生结合临床实际情况进行解读。国人结核性葡萄膜炎发病机制及眼内液结核分枝杆菌DNA的PCR检测技术有待进一步研究。第二部分临床拟诊结核性视网膜血管炎患者房水及血清细胞因子水平的定量分析目的定量分析临床拟诊结核性视网膜血管炎患者房水及血清中细胞因子水平的变化,初步探讨房水中细胞因子水平在结核性葡萄膜炎中诊断的作用,以进一步探索结核相关性葡萄膜炎发病机制中免疫机制所起的作用。方法收集自2019年12月至2021年6月就诊于江苏省苏北人民医院眼科的临床拟诊结核性视网膜血管炎患者,同时收集与其年龄相匹配的特发性视网膜血管炎患者及老年性白内障患者。分为三组。A组:临床拟诊结核性视网膜血管炎组,14眼;B组:特发性视网膜血管炎组,11眼;C组:对照组(老年性白内障组),10眼。采用流式细胞仪定量检测各组患者房水细胞因子(IL-1B、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-γ、TNF-α、IFN-α)水平,同时检测A组和B组患者血清细胞因子水平,对比分析上述各组患者房水及血清中细胞因子水平的差异。结果1.A、B、C三组患者房水中各细胞因子水平比较。A组房水中IFN-γ水平(2.031±0.610pg/m L)明显高于B组(1.566±0.468pg/m L)和C组(1.525±0.467pg/m L),差异具有统计学意义(P0.05)。A组与B组房水中IL-6、IL-8、IL-17水平均明显高于C组,差异具有统计学意