CTHRC1在类风湿关节炎中的临床应用和对成纤维样滑膜细胞的作用及其机制研究

作     者：胡廷婷 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：谭立明

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：类风湿关节炎 胶原三螺旋重复蛋白-1 成纤维样滑膜细胞 MH7A细胞 

摘      要：背景:类风湿关节炎（RA）是一种发病机制复杂的主要累及关节滑膜组织,并伴随关节内血管翳的增生和进行性骨质破坏的慢性进行性自身免疫性疾病。目前,其病理机制尚不完全明确。成纤维样滑膜细胞（FLS）在RA中过度增殖和迁移,可参与血管翳的形成,侵蚀关节软骨,最终造成骨质破坏。研究发现胶原三螺旋重复蛋白-1（CTHRC1）在滑膜内膜及骨-血管翳界面的RA-FLS中大量表达,但是在RA-FLS中CTHRC1的具体作用及其调控机制尚未见研究报道。因此本课题比较了RA患者血清中CTHRC1蛋白的水平;探究CTHRC1在RA病理进程中对RA-FLS生物学行为的调节作用和机制。目的:第一部分:本研究旨在明确CTHRC1对于诊断RA以及评估疾病活动度的临床价值。第二部分:体外探究CTHRC1对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞株（MH7A）生物学行为的调控作用,主要包括增殖、迁移、侵袭和炎症因子表达等方面。方法:第一部分:本研究纳入RA患者181例,非RA患者（Non-RA）181例及健康体检者64例,ELISA法检测血清CTHRC1水平。应用DAS28-ESR将RA患者分为非活动性RA组和活动性RA组,绘制受试者工作特征（ROC）曲线确定CTHRC1单独及联合其他指标对RA的诊断价值。使用Spearman相关系数和二元Logistic回归分析血清CTHRC1浓度与RA疾病活动度的相关性。第二部分:构建sh-CTHRC1慢病毒载体,转染MH7A细胞从而下调其CTHRC1 m RNA的表达,然后应用q RT-PCR和Western Blot检测MH7A细胞中CTHRC1的敲降效果。最后通过CCK8细胞增殖实验、划痕实验、Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验以及MH7A细胞中的炎症因子表达情况探究CTHRC1敲降后对MH7A细胞体外增殖、迁移、侵袭和炎症因子表达的影响。结果:第一部分:（1）RA组的血清CTHRC1[328.0（236.3～493.7）]水平明显高于健康对照组[162.2（98.7～231.9）]以及Non-RA组[173.2（120.5～279.1）]（P0.01）。同时,活动性RA组CTHRC1浓度明显高于非活动性RA组（P0.01）,且与复合疾病活动度评分及大多数指标呈正相关。（2）CTHRC1诊断RA的灵敏度和特异性分别为87.3%和76.2%,对RA的诊断具有中等以上价值。且与14-3-3η、抗环瓜氨酸多肽抗体（anti-CCP）和抗突变瓜氨酸波形蛋白抗体（anti-MCV）联合检测时能够提高RA的诊断水平。（3）CTHRC1诊断RA疾病活动度的灵敏度和特异性分别为96.4%和75.5%,血清CTHRC1水平诊断活动性RA组和非活动性RA组的曲线下面积（AUC）为0.88。（4）二元Logistic回归分析显示CTHRC1是与RA病情严重程度相关的独立危险因素,OR（95%CI）为1.010（1.001～1.012）。第二部分:（1）CCK8细胞增殖实验表明,CTHRC1敲降后能促进MH7A细胞的增殖能力;（2）与sh-NC组相比,sh-CTHRC1组MH7A细胞的迁移能力明显增强（P0.01）;（3）Transwell细胞侵袭实验提示sh-CTHRC1组的侵袭的MH7A细胞数明显多于sh-NC组（P0.01）;（4）q RT-PCR表明,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激24h后相较于sh-NC组,sh-CTHRC1组MH7A细胞内的白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）和白介素-8（IL-8）的表达水平明显加强（P0.01）。结论:本研究从临床和细胞水平研究了CTHRC1对诊断RA和评估疾病活动度的临床价值,以及对MH7A细胞生物学行为的影响。本研究发现RA患者的血清CTHRC1水平升高,与14-3-3η、anti-CCP和anti-MCV联合检测时能够提高RA的诊断水平。同时,RA患者血清CTHRC1水平随着疾病活动度的升高而升高,与RA病情严重程度呈正相关。当MH7A细胞的CTHRC1敲降后,对细胞的增殖、迁移、侵袭以及炎症因子的表达有显著的促进作用。本研究表明CTHRC1有可能成为RA诊断及治疗的潜在靶点。