小鼠腹膜后胰岛移植治疗糖尿病的研究

作     者：李丹妮 

作者单位：电子科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王轶

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：Ⅰ型糖尿病 胰岛移植 腹膜后移植 肾包膜移植 胰岛素 

摘      要：目的:Ⅰ型糖尿病由于胰岛β细胞受到免疫攻击被完全破坏,导致胰岛素分泌不足。除了补充外源性胰岛素外,胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病的有效手段。适宜的胰岛移植部位,能促进胰岛存活,提高胰岛移植的成功率。因此,本文基于对腹膜后解剖结构的认识行腹膜后胰岛移植,发现腹膜后胰岛移植优于肾包膜胰岛移植。方法:(1)胰岛提取与纯化:将8周龄Balb/c雄性小鼠作为胰岛移植的供体和受体。选用胆总管穿刺灌注胶原酶P充盈胰腺的方法提取胰岛,用Lympholyte 1.1密度梯度离心纯化胰岛。(2)造模:采用链脲佐菌素诱导Balb/c小鼠Ⅰ型糖尿病模型。在造模第三天血糖达324 mg/d L及以上视为造模成功。(3)分组:造模小鼠随机分为四组腹膜后实验组,肾包膜对照组,STZ组和腹膜假手术组。为控制无关变量,计算胰岛当量,统一移植入的胰岛数量,同时所有移植组均不使用免疫抑制剂。(4)手术:进行移植手术,比较肾包膜对照组和腹膜后实验组的手术复杂程度和手术时间,对腹膜后解剖结构进行观察。(5)移植效果:对移植后的小鼠进行随机血糖观察,评估生存曲线,取移植第7天,第14天小鼠尾静脉缓慢推注25%的葡萄糖100μL,进行糖耐量实验,在第0、5、15、30、60、90、120分钟测定血糖浓度。取肾包膜和腹膜后移植物石蜡包埋处理进行胰岛素的免疫荧光观察,比较两组移植胰岛第7天和第14天分泌胰岛素的能力。结果:(1)胰岛制备:采用胶原酶P消化胰岛,Lympholyte 1.1分离纯化胰岛的方式提取一只8周龄Balb/c小鼠胰岛能获得活胰岛比率为(75.79±5.59%)。(2)手术:与肾包膜对照组相比,腹膜后实验组移植手术时间更少。(3)生存曲线:与肾包膜对照组相比,腹膜后实验组的生存百分比更高。(4)随机血糖:与腹膜假手术组和STZ组相比,移植后第14天腹膜后实验组和肾包膜对照组随机血糖出现明显逆转。与肾包膜对照组相比,腹膜后实验组随机血糖有显著差异(p0.01),腹膜后实验组优于肾包膜对照组。移植第100天腹膜后实验组血糖稳定在200 mg/d L以下优于肾包膜对照组。(5)糖耐量:移植第7天,腹膜后实验组在120分钟内血糖浓度率先降到200 mg/d L以下。移植第14天,腹膜后实验组和肾包膜对照组均在120分钟内血糖下降到200 mg/d L以下,腹膜后实验组较肾包膜对照组血糖浓度优先降到200 mg/d L以下。(6)免疫荧光比较:腹膜后实验组与肾包膜对照组移植第7天胰岛素平均免疫荧光强度差异有统计学意义(p0.05),腹膜后实验组胰岛素分泌优于肾包膜对照组。结论:(1)胰岛移植可长期稳定Ⅰ型糖尿病小鼠血糖,是治疗Ⅰ型糖尿病的有效方式。(2)腹膜后有丰富血供,能为胰岛提供充足营养,可作为胰岛移植的优势部位,在比较随机血糖,糖耐量以及胰岛素分泌免疫荧光后,发现腹膜后胰岛移植优于肾包膜胰岛移植。