不同频率和时间电针对大鼠慢性炎性痛的镇痛效应及其背根神经节TRPV1调控机制

作     者：乐小琴 

作者单位：浙江中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：方剑乔

授予年度：2017年

学科分类：1005[医学-中医学] 100512[医学-针灸推拿学] 10[医学] 

主      题：电针镇痛 频率 刺激时间 慢性炎性痛 背根神经节 瞬时受体电位香草酸亚型1 

摘      要：目的建立完全弗氏佐剂（Complete freund’s adjuvant,CFA）诱导的大鼠慢性炎性痛模型,通过不同频率和时间电针（Electro-acupuncture,EA）单次干预CFA大鼠,观察大鼠足跖热痛敏潜伏期（Paw Withdrawal Latencys,PWLs）的变化,探讨电针的频率和时间与镇痛作用的相关性。进一步运用不同频率电针对CFA大鼠进行干预,检测大鼠患侧L4-6背根神经节（dorsalroot ganglion,DRG）瞬时受体电位香草酸亚型 1（transient receptor potential vanilloid type1,TRPV1）水平的变化,比较不同频率电针对CFA大鼠TRPV1的调控,结合PWLs变化明确电针干预慢性炎性痛的优劣效频率。通过TRPV1激动剂（Capsaicin）结合优劣效频率电针干预CFA大鼠,观察其对PWLs的影响,探讨不同频率电针在CFA大鼠镇痛效应上的差异性与DRG中TRPV1水平调控的相关性。方法第一部分:成年雄性SD大鼠,随机分为正常组（normal）模型组（model）、20min EA 组、30min EA 组、45min EA 组、假 EA 组（sham EA）,每个EA组根据干预频率的不同分为:2Hz EA组、100Hz EA组、2/100Hz EA。除normal组外,其余组别大鼠左足底注射CFA 0.1ml建立慢性炎性痛模型。模后1d选用双侧“足三里、“昆仑穴,采用相应电针频率进行干预,电针刺激强度选用0.5-1.5mA（初始强度:0.5mA,20min EA组步进:0.5mA/7min全程共20min;30min EA 组步进:0.5mA/10min 全程共 30min;45min EA 组步进:0.5mA/12min全程共45min）,治疗1次。观察造模前（base）造模后24h、电针干预1d后的PWLs变化。第二部分:成年雄性SD大鼠,随机分为normal组、model 组、2Hz EA 组、100Hz EA 组、2/100Hz EA 组、sham EA 组。造模和电针干预同第一部分30min EA组,每日1次,连续治疗14次。于大鼠造模前（base）、造模后24h、电针干预1d、3d、7d、14d检测PWLs的变化。14d行为学检测完后处死大鼠,采用免疫印迹法、免疫荧光法分别检测患侧L4-6 DRG中TRPV1蛋白水平和阳性细胞表达。第三部分:成年雄性SD大鼠,随机分为model组、2Hz EA+Vehicl 组、2Hz EA+Capsaicin、100Hz EA+Vehicl、100Hz EA+Capsaicin。造模和电针干预同第一部分30min EA组。在14d电针干预前足背皮下注射 25ul Capsaicin（4ug/μl）。在造模前（base）、模后 24h、14d 检测 PWLs的变化。结果第一部分:与normal组比较,模后24h,各组大鼠患侧PWLs在各时间点均显著缩短（P0.01）。介入电针干预20min后,与model组比较,2Hz EA组、100Hz EA组、2/100Hz EA组大鼠患侧PW/Ls均显著延长（P0.01）;与100Hz EA组比较2/100Hz和2Hz EA组PWLs缩短（P0.05）在介入电针干预30min和45min后,2Hz EA组、100Hz EA组、2/100Hz EA组大鼠患侧PWLs均延长（P0.05）;与 100Hz EA 组比较,2Hz EA 组 PWLs 缩短（P0.05）第二部分:与normal组比较,模后24h,各组大鼠患侧PWLs均显著缩短P0.01)与model组比较,介入电针干预后各个时间点,2Hz EA组、100Hz EA组、2/100Hz EA组PWLs均延长（P0.05）。在电针干预7d和14d,与100Hz EA组比较,2Hz和2/100Hz EA组大鼠患侧PWLs均缩短P0.05)。免疫荧光法结果显示:model组大鼠LA-6DRG中TRPV1阳性细胞数量及面积表达率明显增加（P0.01）与model组相比,100Hz EA组大鼠L4-6DRG中TRPV1阳性细胞数量减少和面积表达率降低（P0.05）,2Hz EA组仅见L4 DRG阳性细胞数量减少（P0.05）,2/100Hz EA组大鼠在L4-6DRG中TRPV1阳性细胞面积表达率降低（P0.05）,在L4 DRG中TRPV1阳性细胞数量显著减少（P0.01）免疫印迹法结果显示:model组大鼠DRGL4-6中TRPV1蛋白水平显著增加P0.01),2HzEA组、100Hz EA组及2/100Hz EA组L4-6DRG中TRPV1蛋白水平均显著低于model组（P0.01）;与 100Hz EA 组比较,2Hz、2/100Hz EA 组大鼠 L4和 L6 DRG 中TRPV1蛋白水平增高（P0.05）。第三部分:介入电针干预后,与mdel组相比,2Hz EA+Vehicl 组、100Hz EA+Vehicl 组、100Hz EA+Capsaicin 组 PWLs 均显著延长（P0.01）与 100Hz EA+Vehicl 组相比,2Hz EA+Capsaicin 组、2Hz EA+Vehicl 组、100Hz EA+Capsaicin组PWLs均缩短（P0.05）。结论不同频率（2Hz、100Hz、2/100Hz）和时间（20、30、45min）的电针干预CFA大鼠,所产生的镇痛效果与刺激频率不同有关,与刺激时长不同无关。2Hz、100Hz、2/100Hz电针对CFA大鼠均有镇痛作用,100Hz电针疗效最显著。不同频率电针对炎性痛大鼠镇痛作用的差异性可能与其干预外周DRG水平的TRPV1程度有关。