ANP通过NPRA及Cx43对胃癌细胞MGC-803迁移影响的相关性研究

作     者：孙启莉 

作者单位：承德医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：李春辉

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：胃癌细胞MGC-803 ANP NPRA Cx43 相关性 

摘      要：根据国际癌症研究机构(IARC)发布的2020年全球癌症统计数据来看,全球胃癌新发病例数109万,占新发癌症总数的5.6%,死亡病例数77万,占据癌症死亡总数的7.7%;胃癌的发病率位居第五,死亡率位居第四,严重威胁着人类的健康。因此,靶向药物的治疗就显得至关重要。心房钠尿肽(Atrial Natriuretic Peptide,ANP)是一种由右心房分泌的28个氨基酸残基组成的活性多肽,在心房肌拉伸刺激下分泌。以往的研究证实ANP有血管舒张、利钠、利尿、心脏抗纤维化和抗肥厚作用,近年来研究发现ANP还可以通过多种途径抗癌。心房钠尿肽受体A(natriuretic peptide receptor-A,NPRA)是一个135k Da的糖蛋白。NPRA是ANP最重要的受体,NPRA参与细胞生长、凋亡、增殖和炎症。然而,最近的研究表明,NPRA的表达和信号传导对肿瘤的生长很重要,但在胃癌中的研究甚少。细胞缝隙连接通讯(Gap junction intercellular communciation,GJIC)是通过缝隙连接介导的通讯跨膜方式。GJIC由连接蛋白(Connexin,Cx)组成。Cx属于膜蛋白,有很多个成员,其中Cx43研究最成熟。Cx43蛋白由gap junction protein alpha 1(GJA1)基因编码,分子量约为43 k Da。Cx43包含9个结构域。Cx43与肿瘤的关系最为密切,许多研究发现Cx43介导的GJIC在肿瘤中表达水平和膜定位可影响癌细胞的发生、粘附及转移。然而,ANP与NPRA及Cx43影响胃癌细胞迁移的研究目前未见报道。本实验旨在探讨ANP、NPRA、Cx43对胃癌细胞迁移的影响及相关性,为ANP成为抑制胃癌侵袭、迁移的抑制剂,为NPRA、Cx43成为胃癌的药物靶点提供新理论依据,实验分为两部分进行:第一部分ANP、NPRA基因沉默对胃癌细胞MGC-803迁移的影响目的:探讨NPRA基因沉默和/或ANP对胃癌细胞MGC-803迁移的影响。方法:1.利用Rfect小核酸转染试剂,将NPRA-si RNA和si-NC分别转染入胃癌细胞MGC-803。*** Blot实验和q RT-PCR实验检测各组胃癌细胞MGC-803中NPRA的蛋白和m RNA表达量。3.经我们课题组前期实验研究发现,当10mol/L浓度的ANP作用于胃癌细胞MGC-803时,其增殖和迁移能力明显下降,因此将用此浓度进行本实验。4.实验分组:ANP组、si-NC组、NPRA-si RNA组、ANP+NPRA-si RNA组和Blank组。5.划痕实验检测各组胃癌细胞MGC-803划痕24h、48h迁移能力的变化。结果:1.划痕实验结果显示,ANP组、NPRA-si RNA组,ANP+NPRA-si RNA组胃癌细胞MGC-803的迁移能力明显降低。*** Blot和q RT-PCR结果显示,NPRA-si RNA1组、NPRA-si RNA2组、NPRA-si RNA3组中NPRA的蛋白及m RNA表达均明显降低。小结:***可明显地抑制胃癌细胞MGC-803的迁移能力;***基因沉默可明显抑制胃癌细胞MGC-803的迁移能力;***联合NPRA基因沉默抑制胃癌细胞MGC-803的迁移能力最明显。第二部分ANP抑制胃癌细胞MGC-803迁移与NPRA、Cx43之间的关系目的:在第一部分实验的基础上,探讨ANP抑制胃癌细胞MGC-803迁移与NPRA、Cx43之间的关系。方法:1.实验分组:ANP组、si-NC组、NPRA-si RNA组、ANP+NPRA-si RNA组和Blank组。*** Blot实验检测各组中NPRA、Cx43蛋白表达水平的变化。3.q RT-PCR检测各组中NPRA、Cx43 m RNA表达水平的变化。4.各组实验数据用软件SPSS 26.0进行统计分析,以P0.05为差异有统计学意义;采用Pearson法对NPRA和Cx43进行相关分析,以P0.05为差异有统计学意义。5.用GEPIA2(http://***/)对NPRA进行生存分析,采用Kaplan-Meier法以及Log-Rank检验生存曲线是否存在差异,P0.05差异有统计学意义。结果:1.与si-NC组相比,NPRA-si RNA组细胞中NPRA m RNA及蛋白表达水平均降低,NPRA-si RNA组细胞中Cx43 m RNA及蛋白表达水平均升高。2.与Blank组相比,ANP组细胞中NPRA m RNA及蛋白表达水平均降低,ANP组细胞中Cx43 m RNA及蛋白表达水平均升高。3.与si-NC组相比,ANP+NPRA-si RNA组与ANP