P38γ缺失通过促进Dlg1减轻EtOH和APAP诱导的小鼠肝损伤

作     者：胡爽 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：徐涛

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：P38γ EtOH APAP Dlg1 AML-12细胞 

摘      要：目的:对乙酰氨基酚（Acetaminophen,APAP）是世界上使用最广泛的止痛药之一,其被认为是一种剂量依赖性肝毒素,可引起内源性药物性急性肝损伤,乙醇（Et OH）可加重APAP诱导的肝损伤。Et OH和APAP诱导的肝损伤问题日益突出,但Et OH和APAP诱导的肝损伤机制仍不明确。P38 MAPK是应激激活的丝氨酸/苏氨酸激酶,可感知多种心脏病理,与活性氧的产生密切相关,其由4种亚型组成:α、β、γ和δ。相关研究表明,个别亚型具有特定的作用,并被归类为应激激活激酶。在这四种亚型中,p38γ参与了不同疾病的炎症反应。Bárbara等人证实,p38γ可以通过调节中性粒细胞浸润来重新调节肝脏代谢,p38γ对于调节细胞周期和影响肝肿瘤的发生至关重要。Xu等人发现酒精可以激活Erb-B2受体酪氨酸激酶2（Erb B2）/p38γ信号通路。总之,p38γ极有可能在Et OH和APAP诱导的肝损伤中的脂质积累和氧化应激中发挥重要作用。在这项研究中,我们探讨了p38γ对Et OH和APAP诱导的肝损伤的影响以及Et OH和APAP诱导的AML-12细胞中脂质代谢相关基因以及氧化应激水平的影响,此外,还研究了p38γ在Et OH和APAP诱导的肝损伤中的具体调节机制。方法:在雄性C57BL/6J小鼠中,一方面,通过给予含5%乙醇（v/v）的液体饮食10天,然后灌胃乙醇（25%（v/v）,6 g/kg）一次或注射APAP（200 mg/kg,ip）或两者联合治疗,诱导肝损伤。另一方面,通过尾静脉注射向C57BL/6J小鼠中注射了r AAV9-Sh RNA-p38γ腺相关病毒来构建p38γ沉默小鼠模型。小动物成像、免疫荧光和RT-q PCR实验验证模型构建成功之后,利用原位灌流技术获得小鼠原代肝细胞并提取其蛋白和RNA后,Western blotting和RT-q PCR检测脂质代谢相关基因（Fasn、Acox1、SREBP-1和PPAR-α）的表达水平。在体外,用Et OH和APAP诱导小鼠肝细胞（AML-12细胞）,再向细胞内分别转染p38γ过表达质粒和p38γ-si RNA,RT-q PCR实验证明细胞模型构建成功后,Western blotting和RT-q PCR实验检测脂质代谢相关基因（Fasn、Acox1、SREBP-1和PPAR-α）的表达水平。最后观察p38γ对Et OH和APAP诱导的小鼠肝损伤的具体调控机制。结果:本研究发现p38γ在Et OH和APAP诱导的小鼠肝损伤中的表达升高,p38γ的过表达导致脂质合成和氧化应激相关因子分泌增加,沉默p38γ抑制了AML-12细胞中Fasn和SREBP-1的表达,表明p38γ可能与肝脏脂质积聚和氧化应激有关。同时,体外Co-IP结果表明在AML-12细胞中p38γ可与Dlg1蛋白相互结合,沉默p38γ能够上调Dlg1蛋白的表达,即证明了p38γ可能通过与Dlg1蛋白结合影响Et OH和APAP诱导的小鼠肝损伤中肝脏脂质积聚和氧化应激水平。结论:这些实验结果表明p38γ缺失通过促进Dlg1减轻Et OH和APAP诱导的小鼠肝损伤。